sigma特约代理商|L4390-250g 十二烷基硫酸钠

SDS-PAGE Gels

% ammonium persulfate=0.1 g in 1 ml waterE. 10% SDS3% Stacking layer: 6.3 ml water/2.5 ml soln C/0.1 ml 10% SDS/1.2 ml soln A/10 µl TEMED/100 µl persulfate5X Tray Buffer/liter: 15 g Tris/72 g glycine/5 g SDS. Dilute 1:5 for upper tray and 1:10 for lower tray

SDS-PAGE电泳常见问题分析

（1）还原SDS处理：在上样buffer中加入SDS和DTT(或Beta巯基乙醇)后，蛋白质构象被解离，电荷被中和，形成SDS与蛋白相结合的分子，在电泳中，只根据分子量来分离。一般电泳均按这种方式处理，样品稀释适当浓度，加入上样Buffer，离心，沸水煮5min，再离心加样。 （2）带有烷基化作用的还原SDS处理：碘乙酸胺的烷基化作用可以很好的并经久牢固的保护SH基团，得到较窄的谱带;另碘乙酸胺可捕集过量的DTT，而防止银染时的纹理现象。100μl样品缓冲液中10μl 20%的碘

做 WB 要了解的有关 SDS-PAGE 的基本知识

的 SDS-PAGE 的相关知识。（PS：附带一张简单明了的 DNA 印迹、RNA 印迹及蛋白质印迹流程图～～）一、配胶、制胶首先 SDS（十二烷基硫酸钠，一种阴离子洗涤剂）能使蛋白变性，并使所有蛋白质颗粒表面覆盖一层 SDS→使蛋白均匀地带上负电荷→从而使质量相似但形状或电荷不同的蛋白在电泳液中能以相似的速度进行迁移→→因此 SDS 被加到凝胶溶液、蛋白样品和电泳液中，以确保蛋白在整个过程都展开并保持负电荷。其实所谓的凝胶，其本质是聚丙烯酰胺。过程中，多格聚丙烯酰胺分子相互交联，最后形成一个蛋白