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文献和实验。 B9.加0.4ml Buffer G-B,旋涡振荡15sec。 B10.加0.65ml Buffer P2,用力混合均匀,12000×g 离心1 min。 离心后溶液分相,蛋白质沉淀在相间,DNA 被分配在下相。 B11.将Filter 置于洁净的1.5ml 离心管中。吸弃上相,将下相转入Filter,12000×g 离心1min。 上相无需完全弃尽,在转移无色下相时偶有混入的上相,可在Tip 头内迅速分相,便于丢弃(见图2)。 务必除尽上相,否则将抑制DNA 结合到silica 膜上
;然后以每1 mlTrizol液加入0.2 ml的比例加入氯仿,盖紧离心管,用手剧烈摇荡离心管15秒。 在室温下(15 ℃~30 ℃)放置2~3分钟后,12 000 g(2 ℃~8 ℃)离心15分钟; 3. 取上层水相(离心后,混合物将分离为底层为浅红的. 中层为酚-氯仿相. 上层为无色的水相。RNA包含在水相中,水相的体积约相当于所加的Trizol试剂量的60%)于一新的离心管,按每1 mlTrizol液加0.5 ml异丙醇的比例加入异丙醇,室温(15 ℃~30 ℃)放置10分钟,12 000 g(2 ℃~8 ℃
Chelex-100为悬浊液,使用前要充分振摇,使Chelex-100颗粒悬浮),在振荡器上反复振荡,放入56℃保温30分钟以上。(4)取出后振荡,100℃保温8分钟,振荡后,13,000rpm离心3分钟,上清用于PCR扩增,或放4℃保存备用。(二)血斑(1)剪取约0.5cm2的血斑,加到0.5ml的离心管中,加入500μl纯水,剧烈振荡,室温放置15分钟。13,000离心3分钟,去上清。(可用纯水反复洗至无色,载体不需去除,始终留在离心管中。)(2)以下步骤同全血的提取方法。(三)混合斑(1)取适量含有
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