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文献和实验示例: Jurkat细胞用1μM喜树碱(Camptothecin) (左)或未加药 (右)处理4h,FITC-Annexin V/PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒染色后,流式细胞仪荧光检测。 Annexin V-FITC单阳性细胞为早期凋亡细胞,Annexin V-FITC和PI染色双阳性的细胞为坏死细胞或者晚期凋亡。PI单染色阳性位裸核细胞。 实测数据可能会因细胞类型、细胞凋亡情况,检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。 流式检测细胞凋亡的数据分析方法: 1) 选中所有颗粒,将FSC
Annexin V-PI 双染法 在细胞凋亡的早期就有细胞膜表面破损发生。破损时凋亡细胞表面的磷脂腺丝氨酸(PS)可以从细胞内膜翻转至细胞的外膜。该过程发生在DNA片段化之前,因而检测PS的表达,能反映早期凋亡。AnnexinV是相对分子质量为35 000大小的Ca2+依赖的磷脂结合蛋白,对PS有很高的亲和性,并且可以与暴露于细胞外的PS相结合。利用这一原理,可以将AnnexinV标记荧光来识别早期的细胞凋亡。通常利用AnnexinV-FITC和碘化丙啶(P1)来区分凋亡和坏死细胞。PI
增加,PI等核酸染料进入细胞与细胞核中的核酸结合,发出红色荧光。所以Annexin V-FITC(绿色荧光)常与鉴定细胞死活的核酸染料(如PI)合并使用,来区分凋亡细胞与死亡细胞。 此试剂盒可用于流式细胞仪和组织切片染色。 图1 Annexin V-FITC检测细胞凋亡的原理示意图 图2 凋亡细胞样品的Annexin V-FITC单染流式图 【关于流式图的说明:横坐标的数值表示荧光强度;纵坐标的数值表示细胞数;102 -103 之间高荧光强度的峰为凋亡细胞。】 图
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