小鼠热休克蛋白-90αELISA试剂盒

小鼠热休克蛋白-90αELISA检测试剂盒说明书实验原理:
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人1-磷酸鞘氨醇（S1P）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人1-磷酸鞘氨醇（S1P）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

样本处理及要求:
1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。 需要而未提供的试剂和器材: 1.酶标仪（450nm） 2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3.37℃恒温箱 4.蒸馏水或去离子水

Cecropin    杀菌肽/天蚕抗菌肽单克隆抗体
C17orf87    第十七号染色体开放阅读框87抗体
Calcitonin receptor    降钙素受体抗体
C2a    补体C2a链多肽抗体
CD80    CD80抗体
CD19    CD19抗体
CCL26    C-C元件趋化因子26抗体
C5orf22    5号染色体开放阅读框22抗体
CLCA4    钙激活氯离子通道4蛋白抗体
CCL26 Signal peptide    嗜酸粒细胞趋化蛋白3抗体
CCL26    嗜酸粒细胞趋化蛋白3抗体
chemerin    趋化素抗体
C5orf55     5号染色体开放阅读框55抗体
CXCR7    细胞表面趋化因子受体7抗体
COX7A2    细胞色素c氧化酶7A2抗体
CD36    CD36抗体
CYP11B2    醛固酮合成酶CYP11B2抗体
C7orf16    7号染色体开放阅读框16抗体
C10orf62    10号染色体开放阅读框62抗体
CAPRIN2    胃癌多药耐药相关蛋白
小鼠热休克蛋白-90αELISA检测试剂盒Caseine Kinase 1 alpha    酪蛋白激酶casein kinase Iα抗体
phospho-Caseine Kinase 1 alpha(Tyr294)    磷酸化酪蛋白激酶casein kinase Iα抗体
phospho-Caseine Kinase 1 alpha (Thr1194)    磷酸化酪蛋白激酶casein kinase Iα抗体
Actin Regulatory Protein CAPG    肌动蛋白调节蛋白CAPG抗体
Collagen I    Ⅰ型胶原/1型胶原a1抗体
Collagen III    Ⅲ型胶原蛋白/胶原蛋白3/3型胶原蛋白抗体
CD96    CD96抗体
CECR2    猫眼综合征染色体候选基因2抗体
C1orf146    1号染色体开放阅读框146抗体
C1orf150     1号染色体开放阅读框150抗体
C1orf156     1号染色体开放阅读框156抗体
C1orf159    1号染色体开放阅读框159抗体
C1orf162     1号染色体开放阅读框162抗体
C1orf163    1号染色体开放阅读框163抗体
C1orf122     1号染色体开放阅读框122抗体
C1orf123    1号染色体开放阅读框123抗体
C1orf124    1号染色体开放阅读框124抗体
C2orf3     2号染色体开放阅读框3抗体
C1orf127    1号染色体开放阅读框127抗体
C1orf129    1号染色体开放阅读框129抗体
C1orf130    1号染色体开放阅读框130抗体
C1orf131    1号染色体开放阅读框131抗体
C1orf135    1号染色体开放阅读框135抗体
C1orf141    1号染色体开放阅读框141抗体
C1orf144    1号染色体开放阅读框144抗体
alpha COP I    COPA蛋白抗体
C1orf185    1号染色体开放阅读框185抗体
phospho-alpha B Crystallin (Ser19)    磷酸化热休克蛋白β5/α晶状体球蛋白B/αB-crystallin抗体
phospho-alpha B Crystallin (Ser45)    磷酸注意事项:
1.严格按照规定的时间和被广泛应用于各种抗原和抗体测定。但ELISA测定中影响因素较多，而且其操作中有一定的技术要求，在检测过程中除正常反应外，有时常见到一些错误的结果。引起ELISA测定错误结果的原因主要有：
①标本因素；
②试剂因素；
③操作因素。

特点:
1、适用于血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。
2、可检测动物类型丰富：人、猴、大鼠、小鼠、豚鼠、兔、猪、犬、牛、绵羊、鸡、虾、鱼等。
3、可检测指标齐全：白介素，干扰素，肺炎衣原体，血管紧张素，炎症因子、血管生成素、动脉粥样硬化因子、趋化因子、生长因子基质金属蛋白酶、脂肪因子等等指标。
自备材料:
1）蒸馏水。
2）加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3）振荡器及磁力搅拌器等。
安全性:
1）避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2）实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3）不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

操作步骤
1）使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。 2）根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
3）加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5）每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7）每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8）取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9）在450nm波长处测定各孔的OD值。
进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
2.洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
3.消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。
4.底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。
5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
6.在储存和温育时避免强光直接照射。
7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
8.任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
9.不能使用过期产品。
10.如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。