大鼠20S蛋白酶体ELISA试剂盒

大鼠20S蛋白酶体ELISA检测试剂盒说明书实验原理:
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人1-磷酸鞘氨醇（S1P）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人1-磷酸鞘氨醇（S1P）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

phospho-AXL (Tyr698+Tyr702+Tyr703)    磷酸化粘附相关激酶抗体
phospho-AKT1 + AKT2 + AKT3 (Thr308+Thr309+Thr305)    磷酸化蛋白激酶B抗体
phospho-AQP2(Ser269)    磷酸化水通道蛋白2抗体
phospho-Amyloid Precursor Protein (Thr743)    磷酸化APP淀粉样肽前体蛋白抗体
phospho-AKT1(Ser129)    磷酸化蛋白激酶B抗体
phospho-Amyloid Precursor Protein (Ser198)    磷酸化APP淀粉样肽前体蛋白抗体
phospho-ATF4 (Ser245)    磷酸化活化转录因子4抗体
phospho-Androgen Receptor (Ser213)    磷酸化雄激素受体抗体
phospho-Androgen Receptor (Ser650)    磷酸化雄激素受体抗体
phospho-AKT1+2+3 (Tyr315+316+312)     磷酸化蛋白激酶AKT1,2,3抗体
phospho-AKT1(Thr34)    磷酸化蛋白激酶B抗体
phospho-ATF2(Ser472)    磷酸化活化复制因子2抗体
3-Apr    凋亡相关蛋白3抗体
ATG18    自噬相关蛋白18抗体
ATG4A    自噬相关蛋白4A抗体
APOA4    载脂蛋白A4抗体
ALOX12    12脂氧合酶抗体
Angiotensin III    血管紧张素III抗体
ADCY3    腺苷酸环化酶3抗体
Angiomotin    血管动蛋白抗体
Adenovirus 5 E1A    腺病毒早期E1A蛋白抗体
phospho-ATF2 (Ser44)    磷酸化活化复制因子2抗体
phospho-ATF2 (Ser94)    磷酸化活化复制因子2抗体
phospho-ATXN1(Thr236)    磷酸化失调症蛋白1抗体
ANKRD17    锚蛋白重复结构域蛋白17抗体
ALDH1A1    胞质乙醛脱氢酶1抗体
ARL3    ADP核糖基化样因子ARL3抗体
15 Lipoxygenase 1    花生四烯酸15脂氧合酶1抗体
ABC2    乳腺癌增强蛋白2抗体
Alpha 1 microglobulin    α1微球蛋白抗体
Alpha B Crystallin    α晶状体球蛋白B/αB-crystallin抗体
ADORA2B    腺苷A2b受体/神经生长因子1受体抗体
ARK5    AMPK的相关蛋白激酶5抗体
ANP32C    致瘤磷蛋白32相关蛋白1抗体
Adenosine deaminase    腺苷脱氨酶抗体
ASB4    含锚蛋白重复序列-细胞因子信号抑制物盒蛋白家族4抗体
ATRNL1    ATRNL1蛋白抗体
AFP4a    AFP4a蛋白抗体
APBB2    铁蛋白Fe65样蛋白1抗体
APBB3    铁蛋白Fe65样蛋白2抗体
APPBP2    β淀粉样蛋白前体蛋白结合蛋白2抗体
Aph-1b    早老素稳定因子样蛋白/γ分泌酶组件蛋白APH1抗体
phospho-AKT1 (Tyr474)    磷酸化蛋白激酶AKT1抗体
phospho-AKT1 (Ser473 + Tyr474)    磷酸化蛋白激酶AKT1抗体
ASH1L    ASH1L蛋白抗体
ADRA2C    α2C-AR能受体抗体
AZI1    中心体蛋白AZI1抗体
ALPK3    α蛋白激酶3抗体（心肌）
ALOXE3    表皮型脂氧合酶3抗体（鱼鳞病相关蛋白）
ANKRD28    锚蛋白重复域28抗体
AFF4    淋巴细胞相关AF4样蛋白抗体
ANKRD12    锚蛋白重复结构域蛋白12抗体
ANKRD13A    锚蛋白重复结构域蛋白13A抗体
ANKRD9    锚蛋白重复结构域蛋白9抗体
ANKS1A    锚蛋白重复及SAM结构域蛋白1A抗体
APM2    脂肪特定转录因子2抗体
APOL3    载脂蛋白L3抗体
ARMC3 (Cancer/testis antigen 81)    肿瘤/睾丸抗原81抗体
ATXN7L2    共济失调蛋白7样2抗体
大鼠20S蛋白酶体ELISA检测试剂盒ARS2    盐耐药蛋白ARS2抗体
ARSA    芳香基硫酸酯酶1抗体
ASNA1    盐转运三磷酸腺苷酶抗体
ATE1    精氨酸tRNA的蛋白转移酶1抗体
ATXN7L1    共济失调蛋白7样1抗体
AUTS2    孤独症易感基因2蛋白抗体（自闭症相关蛋白1）
ATX2    脊髓小脑共济失调2型蛋白抗体
ARSH    芳香基硫酸酯酶H抗体
样本处理及要求:
1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。 需要而未提供的试剂和器材: 1.酶标仪（450nm） 2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3.37℃恒温箱 4.蒸馏水或去离子水

注意事项:
1.严格按照规定的时间和被广泛应用于各种抗原和抗体测定。但ELISA测定中影响因素较多，而且其操作中有一定的技术要求，在检测过程中除正常反应外，有时常见到一些错误的结果。引起ELISA测定错误结果的原因主要有：
①标本因素；
②试剂因素；
③操作因素。

特点:
1、适用于血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。
2、可检测动物类型丰富：人、猴、大鼠、小鼠、豚鼠、兔、猪、犬、牛、绵羊、鸡、虾、鱼等。
3、可检测指标齐全：白介素，干扰素，肺炎衣原体，血管紧张素，炎症因子、血管生成素、动脉粥样硬化因子、趋化因子、生长因子基质金属蛋白酶、脂肪因子等等指标。
自备材料:
1）蒸馏水。
2）加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3）振荡器及磁力搅拌器等。
安全性:
1）避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2）实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3）不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

操作步骤
1）使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。 2）根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
3）加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5）每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7）每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8）取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9）在450nm波长处测定各孔的OD值。
进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
2.洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
3.消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。
4.底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。
5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
6.在储存和温育时避免强光直接照射。
7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
8.任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
9.不能使用过期产品。
10.如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。