脑血管周细胞

脑血管周细胞保存：4℃保存一年，-20℃长期保存
用途：可用于科研实验培养某一类型细胞没有固定的培养条件。

培养操作
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识 3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

规格：    0.2ml
磷酸化胰岛素受体底物-1抗体    英文名称：    phospho-IRS1(Ser789)    规格：    0.1ml
磷酸化胰岛素受体底物-1抗体    英文名称：    phospho-IRS1(Ser636 + Ser639)    规格：    0.1ml
胰岛素诱导基因1抗体    英文名称：    Insig1    规格：    0.2ml
FC段γ受体3/免疫球蛋白G Fc段受体III抗体    英文名称：    CD16    规格：    0.1ml
磷酸化白介素-1受体相关激酶4抗体    英文名称：    phospho-IRAK4 (Thr345)    规格：    0.1ml
IQCF1蛋白抗体    英文名称：    IQCF1    规格：    0.2ml
IQCJ蛋白抗体    英文名称：    IQCJ    规格：    0.2ml
抑制素结合蛋白抗体    英文名称：    IGSF1    规格：    0.2ml
免疫球蛋白超家族成员3抗体    英文名称：    IGSF3    规格：    0.2ml
免疫球蛋白超家族成员6抗体    英文名称：    IGSF6    规格：    0.2ml
免疫球蛋白超家族成员9抗体    英文名称：    IGSF9    规格：    0.2ml
免疫球蛋白超家族成员10抗体    英文名称：    IGSF10    规格：    0.2ml
大脑和睾丸特异性免疫球蛋白超家族成员11抗体    英文名称：    IGSF11    规格：    0.2ml
干扰素α受体抗体    英文名称：    IFNAR1    规格：    0.1ml
磷酸化干扰素α受体抗体    英文名称：    phospho-IFNAR1(Ser535+Ser539)    规格：    0.1ml
脑血管周细胞磷酸化胰岛素受体β抗体    英文名称：    Phospho-Insulin Receptor Beta (Tyr1185)    规格：    0.1ml
核因子κB抑制蛋白E抗体    英文名称：    IKBKE    规格：    0.1ml
磷酸化整合素β4抗体    英文名称：    phospho-ITGB4(Tyr1494)    规格：    0.1ml
磷酸化整合素β4抗体    英文名称：    phospho-ITGB4(Tyr1526)    规格：    0.1ml
IQCD蛋白抗体    英文名称：    IQCD    规格：    0.2ml
IQCC蛋白抗体    英文名称：    IQCC    规格：    0.2ml
IQCA1蛋白抗体    英文名称：    IQCA1    规格：    0.2ml
集成复杂蛋白亚单位3抗体    英文名称：    INTS3    规格：    0.2ml
干扰素alpha 14蛋白抗体    英文名称：    IFNA14    规格：    0.2ml
白介素6抗体    英文名称：    IL-6    规格：    0.1ml
白细胞介素-10抗体    英文名称：    IL-10    规格：    0.1ml
白介素6抗体    英文名称：    IL-6    规格：    0.1ml
磷酸化内质网核信号转导蛋白a1抗体    英文名称：    phospho-IRE1a (Ser 726)    规格：    0.1ml
白细胞介素28受体抗体    英文名称：    IL-28R    规格：    0.2ml
KB抑制蛋白激酶Ζ抗体    英文名称：    IKB zeta    规格：    0.2ml
胰岛素基因增强结合蛋白1抗体    英文名称：    Islet 1    规格：    0.2ml
整合素β1结合蛋白2抗体    英文名称：    ITGB1BP2    规格：    0.2ml
线粒体翻译起始因子3抗体    英文名称：    IF3    规格：    0.2ml
白细胞介素27β抗体    英文名称：    IL-27beta    规格：    0.2ml
胰岛素样生长因子1受体抗体    英文名称：    IGF1R    规格：    0.1ml
FBXL11蛋白抗体    英文名称：    FBXL11    规格：    0.2ml
免疫球蛋白超家族成员21抗体    英文名称：    IGSF21    规格：    0.2ml

注意事项：
1. 收到细胞后先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养，隔天再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及时和我们，信息确认后我们为您再免费寄送一次。
4. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。
5. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和公司技术部沟通交流。
6. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。
实验步骤：
1. 将解剖用的剪刀、镊子和刀片进行无菌消毒。
2. 将怀孕小鼠用颈椎脱位法处死，将其固定在解剖板上。
3. 用70％乙醇喷洒在小鼠的腹部进行消毒，用一把剪刀和一把镊子把孕鼠外皮剪开，用另外一把剪刀和一把镊子把内皮剪开，露出子宫，最后用第三把剪刀和镊子将子宫小心取出放在盛有PBS的玻璃平皿中，冲洗去血。
4. 用两把弯镊子将胚胎外的胞膜小心去除，然后夹掉头和内脏，将其余胚胎转移到一个装有30 mLPBS的50 mL离心管中，轻轻颠倒两次，倒掉PBS，再重复此步骤一次，留少许PBS，将胚胎转移到另一装有PBS的平皿中，用手术刀片将其切碎至可用微量移液器吸取。
5. 用200μL的微量移液器反复快速吹打平皿中的液体，放在15 mL离心管中，
4℃ 1500 r／min离心5 min，倒掉上清液，加10 mL胰蛋白酶，重悬沉淀，37℃水浴中消化30 min，且每隔5 min轻轻晃动，使之充分消化。
6. 将上层细胞悬液倒入一装有10 mL DMEM培养基的50 mL离心管中，用200目尼龙滤网过滤后，1 500 r／min离心5 min，弃去上清液。
7. 用移液管吸取30 mL DMEM培养基，让培养液沿离心管壁缓缓流入管底，1 500 r／min离心5 min，弃掉上清液。重复一次此步骤。 8. 将细胞沉淀用15 mL培养基悬起。细胞计数(8只14天胎鼠可获得(2～3)×107个细胞)。
9. 将3×106个细胞悬浮于15 mL含10％小牛血清的DMEM培养基中，接种到200 mL的培养瓶中。
10. 24 h后更换新鲜的含10％小牛血清的DMEM培养基。
11. 细胞长满后，弃掉培养基，用PBS小心冲洗，倒掉，加胰蛋白酶消化。
12. 轻轻晃动细胞培养瓶，见有细胞浮起，立即加入2 mL血清终止消化，用移液管把细胞轻轻悬起，混匀，使细胞成为单细胞悬液。
13. 1500 r／min离心5 min。弃掉上清液。加入10 mL含小牛血清的DMEM培养基，悬起细胞，按1：5传代。
14. 细胞再次长到覆盖率80％～90％，将其消化后，常规冻存(冻存液要现配)。
15. 实验结果：可拍照存留。