- ￥1600
- 伊塔生物
- 中国/进口
- YT0347
- 2025年07月15日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
ITTABIO
- 保质期：
3年
- 英文名：
BenzamidineSepharose
- 库存：
55
- 供应商：
北京伊塔生物科技有限公司
- CAS号：
13321
- 规格：
25mL
6B苯甲脒-琼脂糖凝胶6B 6B苯甲脒-琼脂糖凝胶6B 名称：6B苯甲脒-琼脂糖凝胶6B 6B苯甲脒-琼脂糖凝胶6B 货号：YT0347 英文名称：BenzamidineSepharose 品牌：伊塔生物 CAS:133 规格：25mL
产品名称：苯甲脒-琼脂糖凝胶6B
基质：6%的琼脂糖凝胶
平均粒径：45-165μm
配基密度：5-7 μmol/ml
吸附载量：8-15 mg胰蛋白酶/ml
工作PH值：2-8
最大流速：75cm/h
保存条件：4～8℃密闭保存
苯甲脒类物质是丝氨酸蛋白酶的广谱抑制剂，所以将这类物质偶联到琼脂糖凝胶上，可以从各
种来源的样品中一步纯化胰蛋白酶、凝血酶、尿激酶、激肽释放酶、前激肽释放酶等丝氨酸蛋白酶。
苯甲脒琼脂糖凝胶由于应用新的活化方法所以流速高，非特异吸附少，而且填料粒度均匀，所
以分离效果好，是纯化丝氨酸蛋白酶类最适合的填料。
实验名称：苯甲脒琼脂糖凝胶6B分离尿激酶。
实验步骤：
（1） 苯甲脒琼脂糖凝胶6B装柱，1.6×20m，柱床体积为10ml
（2） 用缓冲液1平衡2-5个床体积，流速为2ml/min
（3） 取尿激酶粗品200mg溶解在20ml的缓冲液1中，用0.45μm的滤膜过滤，上样，流速为
1ml/min
（4） 用缓冲液1再洗2-5个床体积，流速为2ml/min
（5） 最后缓冲液2进行洗脱，流速为2ml/min，收集洗脱峰，用SDS-PAGE纯化后的效果。
（6） 用纯水洗5个柱床体积，然后分别用100mM，pH8.0Tris-HCl缓冲液含1M NaCl和100mM，
pH4.0的醋酸缓冲液含1M NaCl交替洗涤3次，再用纯水洗3个柱床体积，然后再用20%的乙醇冲
洗3个柱床体积，流速为2ml/min，柱子置于+4~8℃环境中保存。
缓冲液组成：缓冲液1：100mM pH7.4的PBS缓冲液；缓冲液2：100mM醋酸缓冲液，pH4.0。
也可以用这个填料特异去除各种融合蛋白酶切后的丝氨酸蛋白酶，例如凝血酶以及胰蛋白酶类
蛋白酶。例如去除凝血酶上样缓冲液为：50mM pH7.4的PBS缓冲液含0.15M NaCl,洗脱缓冲液为：
50mM pH7.4的PBS缓冲液含1M NaCl。
色谱柱装填
（1） 所有需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样，液体最好做脱气处理。
（2） 在柱子下端加入蒸馏水，以除去柱子中的空气，关闭柱子出口，在柱内保留少量的蒸馏水。
（3） 将琼脂糖凝胶连续倒入柱子时，要用玻璃棒的紧靠柱子内壁引流，以减少气泡的产生，让填
料先自然沉降。
（4） 柱压不超过0.3MPa，如果装柱系统中无法测柱压，则控制流速高于300cm/h，但是在使用中
一般只用最大流速的75%。
2. 蛋白的结合
平衡缓冲液可以采用如下配方：100mM pH7.4的PBS缓冲液，0.1M NaCl，pH8.0。上样完毕后，
继续用平衡缓冲液洗柱子，直到基线平稳。
3. 蛋白的洗脱
（1） 洗脱可以采取特异性或者非特异性洗脱。
（2） 特异性洗脱可以用目标分子的竞争剂，对甲脒的抑制剂。对非特异性洗脱而言，
可以选用以下几种方法：
a 改变离子强度，通常加入1M的NaCl，必要的话可以采用阶段洗脱或线性梯度洗脱。
b 改变pH，可采用阶段洗脱洗脱或线性梯度洗脱来达到目的。
c 降低洗脱缓冲液的极性。如可以在洗脱缓冲液中加入10%的二氧六环等。
d 使用变性剂。如在洗脱缓冲液中加入尿素、盐酸胍等。
1． 再生
用纯水洗5个柱床体积，然后分别用100mM，pH8.0Tris-HCl缓冲液含1M NaCl和100mM,pH4.0
的醋酸缓冲液含1M NaCl交替洗涤3次，再用水洗3个柱床体积，然后再用20%的乙醇流洗3个柱床体
积，流速为2ml/min，柱子置于+4~8℃环境中。
如果在色谱操作过程中用到了变性剂或者去污剂，也可以用上述方法洗柱子。
2. 清洗
在应用中，柱子上结合的一些物质如变性蛋白和脂质等不能通过再生过程去除，这种情况下，
可以用去污剂如0.1%Triton X-100在37℃洗柱子1min。之后立即用5个床体积的平衡液洗柱子。
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文献和实验«Inhibitory effects of aan aqueous extract from Cortex Phellodendri on the growth and replication of broad-spectrum of viruses in vitro and in vivo»作者Jae-Hoon Kim 影响因子PMID: 27484768PMCID: PMC4970287DOI: 10.1186/s12906-016-1206-x Faecalicatena absiaana sp. nov., an obligately anaerobic bacterium from a pig farm faeces dump.作者Shin Y, Paek J, Kim H, Kook JK, Chang YH.Int J Syst Evol Microbiol. 2022 Feb;72(2). 影响因子doi: 10.1099/ijsem.0.005238.PMID: 35159617
SephadexG-10葡聚糖凝胶 G-10 分离范围Sephadex G-15 葡聚糖凝胶 G-15 分离范围Sephadex G-15 葡聚糖凝胶 G-15 分离范围Sepharose 6B 琼脂糖凝胶 6B 分离范围：1000-5000，适用于脱盐、肽与其它小分子的分离ConA-Sepharose ConA琼脂糖凝胶 分离范围：1000-5000，适用于脱盐、肽与其它小分子的分离Sephadex G-25 Medium 葡聚糖凝胶 G-25 中 分离
。而凝血酶可以用肝素琼脂糖凝胶FF或苯甲脒琼脂糖凝胶FF分离。 (三) 白A融合蛋白可以用IgG琼脂糖凝胶FF分离。 (四) 涵体蛋白的色谱复性: 离子交换和疏水色谱都在包涵体复性中有很好的效果，金属螯合色谱填料等亲和色谱填料也常用于带HIS标签融合蛋白的色谱复性。 8. 疫苗的纯化 疫苗可以用琼脂糖凝胶FF分离。 9. DNA疫苗的纯化 DNA疫苗要求超螺旋DNA含量大于90%，用DNA纯化琼脂糖凝胶FF就可以专门用于各种结构的DNA的分离，一步色谱后超螺旋含量可大于90
到纯化的问题，大大简化了纯化的步骤，但还是会遇到些实际的问题，所以需要详细阅读使用说明和注意事项。(一)HIS 标签重组蛋白可以很方便用镍琼脂糖凝胶FF 分离，色谱填料已经螯合好了镍离子，使用非常方便，吸附载量更高，特异性更强，可以选择多种洗脱方式，是纯化这类融合蛋白的最佳工具。(二)ST 融合蛋白在表达时同时表达了谷胱甘肽s 转酶，很方便用GST 琼脂糖凝胶FF 分离，然后再用肠激酶或凝血酶等酶解就得到表达的产物。而凝血酶可以用肝素琼脂糖凝胶FF 或苯甲脒琼脂糖凝胶FF 分离。(三)白A 融合
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