是从抗血清中分离出来的完整的分子。这些抗体有一个 Fc 部分和两个与抗原结合的 Fab 部分,因此是二价的。Whole IgG抗体适用于多数情况,也是性价比ZUI高的。
F(ab')2 片段抗体
是用胃蛋白酶消化 IgG 去除 Fc 部分,剩下两个靠二硫键连接的结合抗原的 Fab 部分(依然是二价的)。这些抗体用在特定的情况中,例如避免抗体与 Protain A 或 G结合,或者与有 Fc 受体的活细胞结合。但是,如果一抗是 whole IgG,不管二抗是哪种形式都可能出现结合 Fc 受体。这时,为了阻止抗体结合到 Fc 受体上,可以在 4 度将细胞预培养于含有叠dan钠和二抗来源物种正常血清的缓冲液中。
这类抗体和 IgG 重链的 Fc 部分反应。它们通过了 ELISA 检测,和/或针对 Fab 片段吸附的测试。某些情况下,这类抗体需要额外检测和处理来降低和 IgM 或 IgA 的交叉反应。在这种情况下(anti- human,-mouse,-rat),它们会被描述为“Anti-IgG, Fcγ fragment specific”。
注意:不是所有 anti-IgG, Fc抗体和所有亚型的 IgG 反应能力一致。要找和四种 IgG 亚类反应能力差不多的 anti-mouse IgG, Fcγ 抗体的话,应当选 Goat Anti-Mouse IgG(subclasses 1+2a+2b+3), Fγc fragment specific (min X Hu,Bov,Rb Sr Prot)
Anti-IgG,Fcγ Subclass specific
这类抗体分别和不同的小鼠 IgG 亚型重链的 Fc 部分反应。它们经过 ELISA 和/或针对 Fab 片段、IgM 和其他小鼠 IgG 亚型的吸附测试。
A. 耦联的探针。如果没有耦联,不用写。
C. 二抗的来源物种名称。
D 和该抗体反应的物种名称。
E. 抗体特异性描述。
F. 经过吸附处理以后减小了交叉反应的物种名称。
使用带标记的二抗进行多标记(ML)实验
同时检测一个以上的抗原至少依赖两个重要标准:
1. 有如下的二抗:a. 不相互识别(来源于相同的物种),b. 不识别实验系统中其他的一抗,c.不识别实验系统中其他物种的免疫球蛋白,d. 不识别样品中内源性的免疫球蛋白。
2. 探针的使用是被很好的验证过的(酶反应产物,荧光团,或者电子密度颗粒)。亲和层析法纯化的标有 ML 的抗体都是针对上面的标准来特别制备的。下面这个例子是众多应用这些试剂进行多标记实验的实验步骤中的一个。
耦联到亲和层析纯化的抗体和其他蛋白上的探针
A. 仪器。比如,光源,滤片,检测系统。
B. 多标记中对色彩区分程度的要求。比如,若丹明红-X (RRX)和德克萨斯红(TR)荧光素的区别就比和四甲基若丹明(TRITC)或者 Cy3 的区别明显。
C. 要求的灵敏度。比如,Cy3 和 Cy5 就必其他的荧光团要亮。
Aminomethylcoumarin Acetate (AMCA)