SDS-PAGE蛋白质低分子量标准 , 14400～97

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量（垂直板型电泳）（图）

低分子量标准蛋白试剂盒，中国科学院上海生物化学研究所东风生化试剂厂生产（表16-2）。 表16-2  5种标准蛋白质 每种蛋白含量为40μg。用时加入200μl样品溶解，经处理后，上样10μl（2μg）就能显示出清晰的条带。 ③自己配制低分子量或高分子量标准蛋白质混合试剂。如买不到标准蛋白试剂盒时，可参考常用的标准蛋白质及其分子量表。从中选择3～5种蛋白质，如马心细胞色素C（Mr12 500）、牛胰胰凝乳蛋白原A（Mr25 000）、猪胃胃蛋白酶（Mr35 000）、鸡卵卵清蛋白

聚丙烯酰胺凝胶平板等电聚焦电泳测定蛋白质等电点（图）

，培养皿（120mm），脱脂棉，棕色试剂瓶，吸液管，吸耳球，玻璃纸，坐标纸。 2．试剂： 重蒸水，丙烯酰胺（重结晶），甲叉双丙烯酰胺（重结晶），过硫酸铵，TEMED（四甲基乙二胺），载体两性电解质（pH3.5～10），考马氏亮蓝R250，液体石腊，乙醇（95%），硅油，磺基水杨酸，三氯乙酸，甲醇，乙酸（36%），已知pI蛋白质样品和标准等电聚焦样品（市售），磷酸，氢氧化钠。 3．溶液配制： （1）单体贮液：丙烯酰胺2.91g，甲叉双丙烯酰胺0.9g，重蒸水溶解，定容到100ml，过滤

琼脂糖凝胶电泳实验技巧

4 结果分析 较成功的电泳结果是分子量标准条带整齐清晰，样品条带也整齐清晰，如果条带模糊暗淡，单从琼脂糖凝胶电泳角度来说，可能的原因：溴化乙锭的质和量怎样?溴化乙锭见光易分解，母液配制时间过长或保存不当(一般4℃ 避光保存一年内有效)，或者终浓度没达到0．5 vg／ml；电泳槽中缓冲液使用次数过多，缓冲能力下降。特别是TAE缓冲液，一般用2～3次就要更换，TBE缓冲液则可使用10次左右。 实际工作中经常发现DNA 分子量标准小片段模糊不清，那足因为琼脂糖凝胶浓度一般不会超过2 0％ ，较小