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- 上海一研
- 6.25U/L~200U/L
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- EY-H99057
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 供应商：
上海一研
- 检测范围：
6.25U/L~200U/L
- 检测方法：
ELISA
- 适应物种：
人、猴、大鼠、小鼠、豚鼠、兔、猪、犬、牛、绵羊、鸡、虾、鱼等。
- 标记物：
1
- 样本：
Total protein S
- 规格：
48T/96T
本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中的含量。
有效期：6个月
保存条件：2-8℃
实验所需自备试验器材：
1. 酶标仪（450nm）
2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
4. 蒸馏水或去离子水
实验结果计算：
绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。
操作流程如下：
（1） 仅用于科研待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。
（2）酶标板置4℃，包被过夜。
（3）洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去），之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
（4）阴性对照孔每孔加入PBS 50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
（5）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。
（6）洗板，同（4）。
（7）每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液100μl。
（8）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。
（9）洗板，同（4）。
（10）每孔加TMB显色液100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。
（12）分别测450nm吸光值W1和630nm吸光值W2，最终测得的OD值为两者之差（W1-W2），以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
（13）数据处理：在得出标本（S）和阴性对照（N）的OD值后，计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。
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文献和实验RIPA裂解液提总蛋白时，加入蛋白磷酸酶（大多需要37度孵育？？），然后再western，观察其漂移是否消失？ 磷酸酶37度孵育才有用，蛋白酶抑制剂多加些可以吗？ 2. 用蛋白质组学里的二维电泳呢？ 二维电泳后的胶可以像western那样转膜，显影吗？ 我看到文献里好像都是直接染胶了呀。。。 selleckchem01 楼主为什么不考虑采用磷酸化的抗体呢？ 比如，对于目的基因A可以先分别用anti
又如何呢？固定后的PAGE胶，蛋白不会迁移了，可是抗体和检测试剂能“渗透”进去的量就有限了。多谢化学发光法的高度灵敏，UnBlot的检测灵敏度是1ng，和经典的ECL化学发光法相当，不单适合压片显影，也适合CCD成像系统检测，绝对满足一般实验的检测要求。虽然从检测极限的数字上看起来好像不如那些动辄pico、Fremo的检测试剂盒那么高，但是要把在转膜过程中的蛋白损耗和被破坏的抗原决定簇算在内啊，可能也差不多了。UnBlot防止了这2种情况的发生并且帮助不易转膜的蛋白检测，这可是怎么也不能换算
”分析MAPK磷酸化蛋白和总蛋白，以二者的比值评价MAPK的磷酸化状态。结果表明，人resistin可通过活化ERK 1/2、p38信号转导途径而诱导HCAEC增殖和迁移，提示人resistin可能在与血管发生有关的血管疾病中发挥作用。Sakai［20］为研究缺失突变的EGFR（表皮生长因子受体）的生物学作用，将转染EGFR的293细胞、人非小细胞肺癌细胞系A549、PC 9细胞在加入EGF培养后，取细胞裂解液用上述磷酸化蛋白检测试剂盒定量分析EGFR、p44/42 MAPK、p38 MAPK
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