Vitamin D-binding protein ELIS

Vitamin D-binding protein ELISA Kit需要而未提供的试剂和器材
1. 酶标仪（450nm）
2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
4. 蒸馏水或去离子水

样本处理及要求
1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

实验材料与试剂配制：
1. 仪器与材料：酶标仪（使用前预热30分钟），微量加液器、吸头、蒸馏水或去离子水，滤纸。
2. 缓冲液使用：加5ul 的缓冲液于50ul 的样品中，如果样品量不够或者不确定，缓冲液和样品的混合比例不要小于1:10即可。
混匀，静置1小时备用（如果标本是血清或者血浆，此步骤忽略）。
3. 洗液的配制：按1:100的比例配制洗液备用。
LDHC/Cancer,testis antigen 32  乳酸脱氢酶LDH-C（肿瘤/睾丸抗原32）抗体     0.1ml
Mannan Binding Lectin  甘露聚糖结合凝集素抗体     0.2ml
LEF-1  淋巴增强因子-1抗体     0.1ml
Legumain  半胱氨酸蛋白酶抗体     0.2ml
Leptin  瘦素抗体     0.1ml
Leptin  瘦素抗体     0.1ml
Leptin  瘦素抗体     0.1ml
Leptin receptor/Ob-R  瘦素受体抗体     0.1ml
Leptin receptor(long)  瘦素受体抗体（长）     0.1ml
Leptin receptor/OB-R  瘦素受体抗体     0.1ml
L-enk  亮氨酸脑啡肽抗体     0.1ml
GPR49/LGR5  G蛋白偶联受体49抗体     0.1ml
sLOX 1  可溶性凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1抗体     0.2ml
GPR39  G蛋白偶联受体39抗体     0.1ml
LH  人促黄体生成素抗体     0.1ml
LH beta  促黄体生成素抗体     0.1ml
LH  促黄体生成素抗体     0.1ml
LHR/CGR  促黄体生成素受体抗体     0.2ml
HDC  L-组氨酸脱羧酶抗体     0.1ml
LHRH/GNRH  黄体激素释放激素类似物抗体     0.1ml
LIF  白血病抑制因子抗体     0.1ml
LIFR/CD118  白血病抑制因子受体抗体     0.1ml
Lingo-1  Nogo受体反应蛋白抗体     0.1ml
LIMK1  单丝氨酸蛋白激酶1抗体     0.1ml
Phospho-LIMK1(Thr508)/LIMK2(Thr505)  磷酸化单丝氨酸蛋白激酶1/2抗体     0.1ml
LIR-6  白细胞免疫球蛋白样受体6抗体     0.2ml
LIR-8/CD85c/LILRB5  白细胞免疫球蛋白样受体8抗体     0.2ml
LIS1  无脑回的致病基因LIS1抗体     0.2ml
LILRB3/CD85a/PirB  白细胞免疫球蛋白样受体-B抗体     0.2ml
LIX1  LIX1抗体     0.2ml
Livin  凋亡抑制蛋白抗体     0.1ml
LKB1  苏氨酸蛋白激酶LKB1抗体     0.1ml
phospho-LKB1 (Thr363)  磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶抗体     0.1ml
Vitamin D-binding protein ELISA Kitphospho-LKB1(Ser334)  磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶抗体     0.1ml
phospho-LKB1(Ser428)  磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶抗体     0.1ml
Phospho-LKB1(Thr189)  磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶抗体     0.1ml
LFABP/FABP-1  肝脏型脂肪酸结合蛋白抗体     0.2ml
LFABP/FABP-2  肝脏型脂肪酸结合蛋白抗体     0.2ml
laminin  层粘连蛋白抗体     0.1ml
Laminin Beta 1  层粘连蛋白β1抗体     0.2ml
Laminin B2 gamma 1  层粘连蛋白B2γ1抗体     0.1ml
lamin A/C  核纤层蛋白A抗体     0.1ml
Phospho-Lamin A/C(Ser22)  磷酸化核纤层蛋白A/C抗体     0.1ml
Lamin B [Nuclear Envelope Marker]  核纤层蛋白B抗体(细胞核内参)     0.1ml
Lamin B Receptor  核纤层蛋白B受体抗体     0.2ml
lamin A/C  核纤层蛋白A/C抗体     0.2ml
LOX-1/OLR1  凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体抗体     0.2ml
EDG2/LPA1  溶血磷脂酸受体蛋白1抗体     0.1ml
操作步骤：
1. 取出试剂盒，室温（20-25℃）放置 30 分钟。 2. 分组：取出 96 孔板，根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数，把剩余的板条继续冷藏处理。分别设标准品组（6 个浓度）、空白孔、待测样品组。
注：为减少实验误差，保证准确性，建议设置复孔。
3. 加样：依照标准品的顺序分别加入 50ul 的标准品溶液于空白微孔中；空白对照孔加入 50ul 的蒸馏水；其余微孔中加入 50ul的待测样本。
4. 加酶标溶液：标准品组、待测样本组各孔中加入 100ul 的酶标溶液（空白对照孔除外）。
5. 温育：酶标板用封板纸密封后，放入湿盒内于 37℃恒温孵育 1 小时。
6. 洗板：用稀释后的洗涤液注满每孔，静置 15-30s，充分清洗酶标板 5 次，用吸水纸彻底拍干。 7. 显色：各孔加入显色剂 A 液 50ul 后，再加入显色剂 B 液 50ul。
8. 终止：25-37℃下避光反应 10-15 分钟，加入 50ul 终止液。
9. 读板：在 450nm 波长读取各孔的 OD 值。