Peroxiredoxin-6 ELISA Kit

Peroxiredoxin-6 ELISA Kit需要而未提供的试剂和器材
1. 酶标仪（450nm）
2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
4. 蒸馏水或去离子水

IgG     0.1ml
Goat Anti-Guinea pig IgG/Cy5.5  Cy5.5标记的羊抗豚鼠IgG     0.1ml
Goat Anti-Guinea pig IgG/Cy7  Cy7标记的羊抗豚鼠IgG     0.1ml
Goat Anti-Guinea pig IgG/PE  PE标记的羊抗豚鼠IgG     0.1ml
Goat Anti-Guinea pig IgG/PE-Cy3  PE-Cy3标记的羊抗豚鼠IgG     0.1ml
Goat Anti-Guinea pig IgG/PE-CY5  PE-CY5标记的羊抗豚鼠IgG     0.1ml
Goat Anti-Guinea pig IgG/APC  APC标记的羊抗豚鼠IgG     0.1ml
Goat Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350标记的羊抗豚鼠IgG     0.1ml
Goat Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488标记的羊抗豚鼠IgG     0.1ml
Goat Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555标记的羊抗豚鼠IgG     0.1ml
Goat Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647标记的羊抗豚鼠IgG     0.1ml
Goat Anti-Guinea pig IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5标记的羊抗豚鼠IgG     0.1ml
Goat Anti-Guinea pig IgG/PE-Cy7  PE-Cy7标记的羊抗豚鼠IgG     0.1ml
Goat Anti-rabbit IgG/HRP  辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG     0.1ml
Goat Anti-rabbit IgG/Cy7  Cy7标记的羊抗兔IgG     0.1ml
Goat Anti-rabbit IgG/Cy5  Cy5标记的羊抗兔IgG     0.1ml
Goat Anti-rabbit IgG/PE-CY5  PE-CY5标记的羊抗兔IgG     0.1ml
Goat Anti-rabbit IgG/PE  PE标记的羊抗兔IgG     0.1ml
Goat Anti-rabbit IgG/Cy3  Cy3标记的羊抗兔IgG     0.1ml
Goat Anti-rabbit IgG/Cy5.5  Cy5.5标记的羊抗兔IgG     0.1ml
Goat Anti-rabbit IgG/PE-Cy3  PE-Cy3标记的羊抗兔IgG     0.1ml
Goat Anti-rabbit IgG/APC  APC标记的羊抗兔IgG     0.1ml
Goat Anti-rabbit IgG/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350标记的羊抗兔IgG     0.1ml
Goat Anti-rabbit IgG/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488标记的羊抗兔IgG     0.1ml
Goat Anti-rabbit IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5标记的羊抗兔IgG     0.1ml
Goat Anti-rabbit IgG/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555标记的羊抗兔IgG     0.1ml
Goat Anti-rabbit IgG/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647标记的羊抗兔IgG     0.1ml
Goat Anti-rabbit IgG/PE-Cy7  PE-Cy7标记的羊抗兔IgG     0.1ml
Goat Anti-rabbit IgG/Bio  生物素标记的羊抗兔IgG     0.1ml
Goat Anti-rabbit IgG/AP  碱性磷酸酶（AP）标记的羊抗兔IgG     0.1ml
Goat Anti-rabbit IgG/Gold  胶体金标记的羊抗兔IgG     0.5ml
Goat Anti-rabbit IgG/FITC  FITC标记的羊抗兔IgG     0.3ml
Goat Anti-rabbit IgG/RBITC  罗丹明标记的羊抗兔IgG     0.3ml
Goat Anti-Chicken IgG/RBITC  罗丹明标记的羊抗鸡IgG     0.3ml
Goat Anti-Chicken IgG/Gold  胶体金标记的羊抗鸡IgG     0.5ml
Goat Anti-Chicken IgG/FITC  FITC标记的羊抗鸡IgG     0.3ml
Goat Anti-Chicken IgG/Cy3  Cy3标记的羊抗鸡IgG     0.1ml
Goat Anti-Chicken IgG/Cy5  Cy5标记的羊抗鸡IgG     0.1ml
Peroxiredoxin-6 ELISA KitGoat Anti-Chicken IgG/Cy5.5  Cy5.5标记的羊抗鸡IgG     0.1ml
Goat Anti-Chicken IgG/Cy7  Cy7标记的羊抗鸡IgG     0.1ml
Goat Anti-Chicken IgG/PE  PE标记的羊抗鸡IgG    样本处理及要求
1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

实验材料与试剂配制：
1. 仪器与材料：酶标仪（使用前预热30分钟），微量加液器、吸头、蒸馏水或去离子水，滤纸。
2. 缓冲液使用：加5ul 的缓冲液于50ul 的样品中，如果样品量不够或者不确定，缓冲液和样品的混合比例不要小于1:10即可。
混匀，静置1小时备用（如果标本是血清或者血浆，此步骤忽略）。
3. 洗液的配制：按1:100的比例配制洗液备用。
操作步骤：
1. 取出试剂盒，室温（20-25℃）放置 30 分钟。 2. 分组：取出 96 孔板，根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数，把剩余的板条继续冷藏处理。分别设标准品组（6 个浓度）、空白孔、待测样品组。
注：为减少实验误差，保证准确性，建议设置复孔。
3. 加样：依照标准品的顺序分别加入 50ul 的标准品溶液于空白微孔中；空白对照孔加入 50ul 的蒸馏水；其余微孔中加入 50ul的待测样本。
4. 加酶标溶液：标准品组、待测样本组各孔中加入 100ul 的酶标溶液（空白对照孔除外）。
5. 温育：酶标板用封板纸密封后，放入湿盒内于 37℃恒温孵育 1 小时。
6. 洗板：用稀释后的洗涤液注满每孔，静置 15-30s，充分清洗酶标板 5 次，用吸水纸彻底拍干。 7. 显色：各孔加入显色剂 A 液 50ul 后，再加入显色剂 B 液 50ul。
8. 终止：25-37℃下避光反应 10-15 分钟，加入 50ul 终止液。
9. 读板：在 450nm 波长读取各孔的 OD 值。