Indian hedgehog protein ELISA

Indian hedgehog protein ELISA Kit需要而未提供的试剂和器材
1. 酶标仪（450nm）
2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
4. 蒸馏水或去离子水

Phospho-Ezrin (Thr567)    磷酸化埃兹蛋白抗体
Phospho-ELk1 (Ser383)    磷酸化细胞转录因子ELK1抗体
Phospho-EphA2 (Tyr594)    磷酸化酪氨酸蛋白激酶A2受体抗体
Ephrin B    Ephrin B抗体
phospho-Ephrin B (Tyr329)    磷酸化Ephrin B抗体
phospho-Ephrin B (Tyr316)    磷酸化Ephrin B抗体
phospho-Ephrin B (Ser300)    磷酸化Ephrin B抗体
phospho-Ephrin B (Tyr324 + Tyr29)    磷酸化Ephrin B抗体
Phospho-Estrogen Receptor alpha (Ser118)    磷酸化雌激素受体α抗体
Phospho-Estrogen Receptor alpha (Ser104 + Ser106)     磷酸化雌激素受体α抗体
EPS8    表皮生长因子受体底物8抗体
ET-1    内皮素1抗体
EV71 polyprotein VP4    肠道病毒71型/手足口病病毒抗体
ERK1 + ERK2    丝裂原活化蛋白激酶1抗体
ERK1    丝裂原活化蛋白激酶3抗体
Estrogen Receptor alpha    雌激素受体α抗体
Estrogen receptor beta    雌激素受体β 抗体
EpCAM    上皮特异性抗原抗体
ET-1    内皮素-1抗体
Eukaryotic aspartyl protease    天冬氨酸蛋白酶家族蛋白抗体
Echidnotoxin    蝮蛇蛇毒蛋白抗体
E2F2    转录因子E2F-2抗体
EphA2    内皮细胞受体蛋白酪氨酸激酶抗体
EphB2 R    酪氨酸蛋白激酶受体B2抗体
Phospho-Estrogen Receptor alpha (Ser167)    磷酸化雌激素受体ER alpha 抗体
EGFP    重组增强型绿色荧光蛋白抗体
ER-Alpha    雌激素受体α抗体（用于western blot）
Estrogen Receptor alpha + beta    雌激素受体α/β抗体
Anei-ENPP2    自分泌运动因子抗体
Ephrin A3    酪氨酸蛋白激酶A3受体抗体
EHM2    EHM2蛋白抗体
phospho-eIF4E (Ser209)    磷酸化真核翻译起始因子4E抗体
eEF1A1    翻译延伸因子EF-1a抗体
Phospho-Estrogen Receptor alpha (Tyr537)     磷酸化雌激素受体α抗体
phospho-EGFR (Tyr1068)    磷酸化表皮生长因子受体样本处理及要求
1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

实验材料与试剂配制：
1. 仪器与材料：酶标仪（使用前预热30分钟），微量加液器、吸头、蒸馏水或去离子水，滤纸。
2. 缓冲液使用：加5ul 的缓冲液于50ul 的样品中，如果样品量不够或者不确定，缓冲液和样品的混合比例不要小于1:10即可。
混匀，静置1小时备用（如果标本是血清或者血浆，此步骤忽略）。
3. 洗液的配制：按1:100的比例配制洗液备用。
Indian hedgehog protein ELISA Kit操作步骤：
1. 取出试剂盒，室温（20-25℃）放置 30 分钟。 2. 分组：取出 96 孔板，根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数，把剩余的板条继续冷藏处理。分别设标准品组（6 个浓度）、空白孔、待测样品组。
注：为减少实验误差，保证准确性，建议设置复孔。
3. 加样：依照标准品的顺序分别加入 50ul 的标准品溶液于空白微孔中；空白对照孔加入 50ul 的蒸馏水；其余微孔中加入 50ul的待测样本。
4. 加酶标溶液：标准品组、待测样本组各孔中加入 100ul 的酶标溶液（空白对照孔除外）。
5. 温育：酶标板用封板纸密封后，放入湿盒内于 37℃恒温孵育 1 小时。
6. 洗板：用稀释后的洗涤液注满每孔，静置 15-30s，充分清洗酶标板 5 次，用吸水纸彻底拍干。 7. 显色：各孔加入显色剂 A 液 50ul 后，再加入显色剂 B 液 50ul。
8. 终止：25-37℃下避光反应 10-15 分钟，加入 50ul 终止液。
9. 读板：在 450nm 波长读取各孔的 OD 值。