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- AAT Bioquest
- 美国
- AAT-B22605
- 2025年11月10日
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齐一生物
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文献和实验没什么差别，而且染色结果非红即绿，这是怎么回事？ sunandsuny: 正常的细胞核的DNA应该呈现比较均匀的黄色或黄绿色的荧光,而RNA呈现黄色或橘红色,,在凋亡时,细胞核和细胞质内呈现致密浓染的黄绿色荧光,甚至是黄绿色碎片.而当细胞坏死时,核溶解,减少，上述黄绿色荧光减少或消失. 所以楼上所说的"非红即绿"可能就出现了凋亡现象,你最好上传一长照片看看. 还有,最好用活细胞染色较好,不要固定.激发光 playboyzmj: 看到大家用AO-EB的方法来检测细胞凋亡。但有几个问题一直搞不懂
越高，说明 抗体 分子上结合的荧光素越多，反之则越少。一般用于固定标本的荧光抗体以f/p＝1.5为宜，用于活细胞染色的以f/p＝2.4为宜。 抗体工作浓度的确定方法类似elisa间接法中酶标抗体的滴定。将荧光抗体自1:4～1:256倍比稀释，对切片标本作荧光抗体染色。以能清晰显示特异荧光、且非特异染色弱的最高稀释度为荧光抗体工作浓度。 荧光抗体的保存应注意防止抗体失活和防止荧光猝灭。最好小量分装，－20℃冻存，这样就可放置3～4年。在4℃中一般也可存放1～
buffer(或含1%BSA的PBS)重悬细胞，用流式细胞仪进行检测和分析。 注意事项 在抗体使用之前，快速离心一下，使之聚集到管的底部。 荧光标记的抗体应该避光4℃保存，不要冷冻。 当染色的时候，固定或延迟分析可能降低某些抗体的荧光信号。为了得到更好的结果，染色后应该马上分析。 二、细胞内细胞因子染色步骤 细胞准备 1.1 收集细胞。经刺激和阻断处理的细胞（具体处理方案请参考文献进行），加细胞染色buffer（或含1%BSA的PBS）制成单细胞悬液，调整细胞浓度约为1 × 107/mL
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