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呼吸道合胞病毒B型RT-PCR
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Respiratory Syncytial Virus-B(RSV-B)
一年
上海康朗生物科技有限公司
负20度
50次
呼吸道合胞病毒B型RT-PCR试剂盒
产品及特点
呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Virus,RSV)是一种 RNA 病毒, 属副粘液病毒科。该病经空气飞沫和密切接触传播,无血球凝集性, 在人上皮组织培养形成特有的合胞。合胞病毒只有一个血清型,最近分子生物学 方法证明有二个亚型。本产品是根据 PCR 原理开发的呼吸道合胞病毒 B 型检测的 试剂盒。它具有下列特点:
1. 一站式,用于不需要单独准备每种成分,包括引物和对照。
2. 根据呼吸道合胞病毒 B 型的保守基因序列设计的引物,具有良好的特异性。
3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。
4. 使用一管式 RT-PCR 技术,RT 和 PCR 两步在一个试管内完成,不需要中间 转移样品,降低了操作误差和可能的污染。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。
6. 本产品只能用于科研,不能用于临床。
呼吸道合胞病毒B型RT-PCR试剂盒规格及成分
成 份
规格
5×双酶一管式 RT-PCR Buffer
200 μL(橘黄盖)
MMLV-Taq Mix
75 μL(红盖)
超纯水
1 mL(亮黄盖)
呼吸道合胞病毒 B 型 RT-PCR 引物 混合液
100 μL(白盖)
呼吸道合胞病毒 B 型 RT-PCR 阳性 对照(1×10E8 拷贝/μL)
50 μL(黄盖)
使用手册
1 份)
运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分 分开放置,因为其容易污染其他成分,造成假阳性。
自备试剂 样品 RNA
使用方法 一、样品 RNA 的制备
1. 如果有 N 个样品,必须设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性 对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL 流行性出血热病毒 PCR 阳性对照的 100 倍稀释作为制备的阳性对照;用水作为制备的阴性对照。 制备所得成为样品 RNA。
2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提 取试剂盒兼容。
二、设置 RT-PCR 反应(20μL 体系)
3. 如果有 N+2 个样品,则标记 N+4 个 PCR 管(额外增加的两个管一个是 RT-PCR 阳性对照,另一个是 RT-PCR 阴性对照)并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分:
成分
样品
阳性对照
阴性对照
各 4 μL
4 μL
呼吸道合胞病毒 B 型 RT-PCR 引物混合液
各2μL
2μL
N+2 个制备的 RNA 样品
各12.5 μL
12.5 μL
呼吸道合胞病毒 B 型 RT-PCR 阳性对照 的 100 倍稀释液
L
4. 上机进行 RT-PCR,RT-PCR 反应参数为:
过程
温度
时间
逆转录
42℃
30 min
预变性
95℃
5 min
PCR 反应 (35 个循环)
30 sec
53℃
72℃
20 sec
5. 琼脂糖电泳检测扩增效果。如果阴性对照有扩增产物或阳性对照无扩增产物, 则说明实验失败,需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有扩增产物、 阳性对照有 122bp 预期的扩增产物的情况下,才有必要分析样品的实验结果, 如果有扩增产物则为阳性,如果无则为阴性。本试剂盒适用于各种 RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增。它采用AMV进行反转录反应,能够获得更长的反转录产物。同时,在20ul反转录体系和50ul PCR反应体系中,还可以一次性得到足够量的PCR产物用于后续的克隆实验。本试剂盒中配置的酶均为进口的酶。RT酶采用进口的AMV,所以cDNA更长,基因的信息保留得更完整!反转录过程中特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷,可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。注意:1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。2. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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