猪圆环病毒3型PCR试剂盒

猪圆环病毒3型PCR试剂盒

Porcine Circovirus 3 (PCV-3)

产品及特点

猪圆环病毒（porcine circovirus，PCV）在分类学上属圆环病毒科圆环病 毒属，为已知的最小的动物病毒之一。病毒粒子直径 14－17nm，呈 20 面体 对称结构，无囊膜，含有共价闭合的单股环状负链 DNA，基因组大小约为 1.76kb。PCV 对外界理化因子的抵抗力相当强。PCV3 于 2016 年首次在美国 报道，与母猪丘疹性皮炎、肾病综合征和流产相关。因此快速检测猪圆环病毒 3 型具有重要意义。本产品就是根据猪圆环病毒 3 型保守区设计引物而开发的 高灵敏荧光定量 PCR 产品，它具有下列特点： 

 

1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增猪圆环病毒 3 型，与其他病原没有 交叉反应。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

猪圆环病毒3型PCR试剂盒规格及成分

编号	成分	规格
试剂一	PCR MagicMix 3.	1 mL（红盖）
试剂二	超纯水	1 mL（亮黄色））
试剂三	猪圆环病毒 3 型 PCR 引 物混合液	100 μL（白盖）
试剂四	猪圆环病毒 3 型 PCR 阳 性对照 （1×10E8 拷贝/μL）	50 μL（黄盖））
试剂五	使用手册	1 份

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。 

自备试剂 样品 DNA。
 

 

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳 性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 1 千倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此 作为 PC。另外用水作为 NC。

2. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数寄生虫 DNA 提取 试剂盒兼容。 

二、设置 PCR 反应（40μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分： 

成分	N+2个 样品管	PCR阴性对照	PCR阳性对照
PCR Magic Mix 3.0	各20 μL	20 μL	20 μL
猪圆环病毒 3 型PCR 引物 混合液	各2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL
PCR 阴性对照（水）		18 μL	-
PCR 阳性对照（猪圆环病毒 3 型PCR 阳性对照的 10000 倍稀释液）	-		18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR反应 （35个循环）	95℃	30 sec
	58℃	30 sec
	72℃	30 sec
最后延伸	72℃	7 min

 

 

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳 性对照必须有 551bp 大小的条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。

本试剂盒适用于各种 RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增。它采用AMV进行反转录反应，能够获得更长的反转录产物。同时，在20ul反转录体系和50ul PCR反应体系中，还可以一次性得到足够量的PCR产物用于后续的克隆实验。本试剂盒中配置的酶均为进口的酶。RT酶采用进口的AMV，所以cDNA更长，基因的信息保留得更完整！反转录过程中特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷，可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。
注意：
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！