小反刍兽疫病毒RT-PCR试剂盒
Peste Des Petits Ruminants Virus(PPRV)
产品及特点
小反刍兽疫(Peste des Petits Ruminants, PPR)是由副黏病毒科麻疹病毒属的小反刍兽 疫病毒( Peste des Petits Ruminants Virus, PPRV) 引起的急性、烈性传染病。它是世界 动物卫生组织(OIE)法定的 A 类传染病,我国将其定为Ⅰ类动物疫病。本产品就是专门用于小 反刍兽疫病毒的快速荧光 RT-PCR 检测的试剂盒,在动物或者动物产品的检测领域有广泛用 途,它具有下列特点:
1. 即开即用,用户只需要提供病毒 RNA 模板。
2. 双酶一管式 RT-PCR,操作简单快捷。本试剂盒足够 25 次 30uL 体系的 RT-PCR 反应。
3. 提供阳性对照,便于在遇到问题时分析原因。
4. 引物经过优化,特异性高,引物是根据 PPR 病毒保守的 N 基因设计,产物长度为 1416 bp。
小反刍兽疫病毒RT-PCR试剂盒规格及成分
编号 |
成 份 |
规格 |
试剂一 |
双酶一管式 RT-PCR Buffer,2× |
375 uL |
试剂二 |
MMLV-Taq Mix |
50 uL |
试剂三 |
RNase-free 水 |
1 mL |
试剂四 |
PPRV 专一性引物一 |
50 uL |
试剂五 |
PPRV 专一性引物二 |
50 μL |
试剂六 |
PPRV 阳性对照 |
50 μL |
试剂七 |
使用手册 |
1 份 |
运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为 6 个月。
自备试剂 样品 RNA。
使用方法 注意:所有离心管用前全部短暂离心几秒使管壁上溶液沉淀到管底。下面以一个 30uL 体系的 RT-PCR 为例,如果体积不同,各成分用量需要适当调节。
一、样品 RNA 的制备
1、用自选方法抽提病毒样品 RNA。注意:可以选用本公司生产的一管式病毒 RNAout 或柱 式病毒 RNAout。
二:RT-PCR 2、在一干净的无 RNase 的 PCR 管中,按下表配制 RT-PCR 反应体系(30 uL 体系):
成分 |
样品 |
阳性对照 |
阴性对照 |
RNA 模板(自备) |
1-10 uL |
|
|
PPRV 阳性对照 |
|
2μL |
|
PPRV 专一性引物一 |
2 uL |
2 uL |
2 uL |
PPRV 专一性引物二 |
2 uL |
2 uL |
2 uL |
RNase-free 水 |
补水到 13 uL |
双酶一管式 RT-PCR Buffer |
15 uL |
15 uL |
15 uL |
MMLV-Taq Mix |
2 uL |
2 uL |
2 uL |
3、轻柔混合均匀后放入 PCR 仪中进行 RT-PCR,反应参数是:
过程 |
温度 |
时间 |
逆转录 |
42℃ |
60 min |
预变性 |
94℃ |
5 min |
PCR 反应 (35 个循环) |
94℃ |
1 min |
55℃ |
1 min |
72℃ |
2 min |
延伸 |
72℃ |
10 min |
三、电泳检测
4、取 10-20 uL PCR 产物直接在 1%琼脂糖凝胶上电泳,正确的扩增产物的大小为 1416 bp。阳性对照必须出现 1416bp 的 PCR 产物,否则 PCR 体系有问题,需要寻找原因。 如果阴性对照出现 1416bp 的 PCR 产物,则说明试剂或环境中有过去 PCR 产物的污染, 需要把样品制备和 RT-PCR 隔离进行。
本试剂盒适用于各种 RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增。它采用AMV进行反转录反应,能够获得更长的反转录产物。同时,在20ul反转录体系和50ul PCR反应体系中,还可以一次性得到足够量的PCR产物用于后续的克隆实验。本试剂盒中配置的酶均为进口的酶。RT酶采用进口的AMV,所以cDNA更长,基因的信息保留得更完整!反转录过程中特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷,可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。
注意:
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!