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巴斯德氏杆菌属通用PCR试剂盒
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Pasteurella spp.
一年
上海康朗生物科技有限公司
负20度
50次
Pasteurella spp
产品及特点
巴斯德杆菌属(Pasteuria spp.)为一类具有分支和隔膜菌丝的产芽孢细 菌,属内各种之间在菌体形态、孢子的形状与大小、芽孢附属物的存在以及芽 孢的形状和大小等细菌特征上表现出不均一性。巴斯德杆菌不仅分布广泛,已 在五大洲及大西洋、太平洋及印度洋的岛屿上发现,而且其寄生的线虫种类繁 多,至今已在自由生活线虫、捕食性线虫、植物寄生线虫和昆虫病原线虫四大 类群的 116 个属 323 个种的线虫体内发现这类细菌。本产品就是为此目的根 据 PCR 原理开发的试剂盒,它具有下列特点:
1. 即开即用,用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化,专一性强,只扩增巴斯德氏杆菌属,与其他微生物没 有交叉反应。
3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次,但只能用于科研。
巴斯德氏杆菌属通用PCR试剂盒规格及成分
编号
成分
规格
试剂一
PCR MagicMix 3.
1 mL(红盖)
试剂二
超纯水
1 mL(亮黄色))
试剂三
巴斯德氏杆菌属通用 PCR 引 物混合液
100 μL(白盖)
试剂四
巴斯德氏杆菌属通用 PCR 阳 性对照 (1×10E8 拷贝/μL)
50 μL(黄盖))
试剂五
使用手册
1 份
运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其 他试剂。
自备试剂 样品 DNA。
使用方法 一、样品 DNA 的制备
1. 如果有 N 个样品,必须设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳 性对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL 阳性对照的 1 千倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此 作为 PC。另外用水作为 NC。
2. 用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数寄生虫 DNA 提取 试剂盒兼容。
二、设置 PCR 反应(40μL 体系)
3. 对 N+2 个样品,在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照,故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分:
N+2个
样品管
PCR阴性对照
PCR阳性对照
PCR Magic Mix 3.0
各20 μL
20 μL
巴斯德氏杆菌属通用PCR 引物 混合液
各2 μL
2 μL
PCR 阴性对照(水)
18 μL
-
PCR 阳性对照(巴斯德氏杆菌属通用 PCR 阳性对照的 10000 倍稀释液)
4. 按下表设置 PCR 反应:
过程
温度
时间
预变性
95℃
5 min
PCR反应
(35个循环)
30 sec
58℃
72℃
15 sec
最后延伸
7 min
三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳 性对照必须有 551bp 大小的条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实 验无效。对没有扩增产物的样品,可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。本试剂盒适用于各种 RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增。它采用AMV进行反转录反应,能够获得更长的反转录产物。同时,在20ul反转录体系和50ul PCR反应体系中,还可以一次性得到足够量的PCR产物用于后续的克隆实验。本试剂盒中配置的酶均为进口的酶。RT酶采用进口的AMV,所以cDNA更长,基因的信息保留得更完整!反转录过程中特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷,可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。注意:1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。2. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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