支原体通用PCR试剂盒
Mycoplasma spp.
产品及特点
支原体和亲缘关系很近的无胆甾原体等统称霉形体。霉形体是目前发现的最 小的的原核生物。它们缺乏细胞壁、有变形能力、能通过滤菌器、可 在无生命培养基中生长繁殖,成为细胞培养中常见的一种污染源,严重影响细 胞生长率、细胞形态、基因表达、细胞代谢和细胞活力。因此,对以支原体为 主的霉形体进行早期检测非常重要,它能使得研究人员在污染扩散前快速采取 有效措施,减低损失。本试剂盒是根据 PCR 原理开发,具有下列特点:
1. 免 DNA 制备,直接用裂解液做 PCR,更加简单快捷。
2. 覆盖广,根据 16S rDNA 保守区设计引物,能检测 40 余种霉形体(包 括欧盟药典要求检测的 9 种支原体)。
3. 特异性高,跟梭状芽孢杆菌、链球菌和乳酸杆菌等亲缘关系相近的微生物 无交叉反应。
4. 灵敏高,可检测低至几个拷贝/反应的支原体污染。
5. 提供内参和无感染性的支原体阳性对照(DNA 段),能有效避免实验结 果的假阳性和假阴性。
6. 可用于培养细胞、疫苗、血清、重组蛋白和耗材的污染检测。但不能用于 临床诊断。
7. 本产品足够至少 50 次 40 μL 体系 PCR 检测(含阳性对照和阴性对照反 应)。
支原体通用PCR试剂盒规格及成分
编号 |
成分 |
规格 |
试剂一 |
PCR MagicMix 3. |
1 mL(红盖) |
试剂二 |
超纯水 |
1 mL(亮黄盖) |
试剂三 |
支原体通用 PCR 引物混合 液 |
100 μL(白盖) |
试剂四 |
支原体通用 PCR 阳性对照 (1×10E8 拷贝/μL) |
50 μL(黄盖)) |
试剂五 |
天净沙核酸释放剂试用装 |
20 次(1mL,绿盖) |
试剂六 |
使用手册 |
1 份 |
运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其 他试剂。
自备试剂 样品 DNA。
使用方法 一、样品 DNA 的制备
1. 如果有 N 个样品,必须设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳 性对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL 阳性对照的 1 千倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此 作为 PC。另外用水作为 NC。
2. 用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数寄生虫 DNA 提取 试剂盒兼容。
二、设置 PCR 反应(40μL 体系)
3. 对 N+2 个样品,在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照,故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分:
成分 |
N+2个 样品管 |
PCR阴性对照 |
PCR阳性对照 |
PCR Magic Mix 3.0 |
各20 μL |
20 μL |
20 μL |
支原体通用PCR引物混合液 |
各2 μL |
2 μL |
2 μL |
N+2 个样品 DNA 模板 |
各 18 μL |
|
|
PCR 阴性对照(超纯水) |
|
18 μL |
- |
PCR 阳性对照(支原体通用 PCR 阳 性对照的 10000 倍稀释液) |
- |
|
18 μL |
4. 按下表设置 PCR 反应:
过程 |
温度 |
时间 |
预变性 |
95℃ |
5 min |
PCR反应 (35个循环) |
95℃ |
30 sec |
55℃ |
30 sec |
72℃ |
60 sec |
最后延伸 |
72℃ |
10 min |
三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳 性对照必须有 551bp 大小的条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实 验无效。对没有扩增产物的样品,可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。
本试剂盒适用于各种 RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增。它采用AMV进行反转录反应,能够获得更长的反转录产物。同时,在20ul反转录体系和50ul PCR反应体系中,还可以一次性得到足够量的PCR产物用于后续的克隆实验。本试剂盒中配置的酶均为进口的酶。RT酶采用进口的AMV,所以cDNA更长,基因的信息保留得更完整!反转录过程中特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷,可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。
注意:
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!