丝状支原体山羊亚种PCR试剂盒

丝状支原体山羊亚种PCR试剂盒

Mycoplasma mycoidessubsp(capri)

产品及特点

羊传染性胸膜肺炎又称羊支原体性肺炎，是由支原体所引起的一种高度接 触性传染病，其临床特征为高热，咳嗽，胸和胸膜发生浆液性和纤维素性炎症， 取急性和慢性经过，病死率很高。引起山羊传染性胸膜肺炎的病原体为丝状支 原体山羊亚种，为细小、多变性的微生物，革兰氏染色阴性。在自然条件下， 丝状支原体山羊亚种只感染山羊，3 岁以下的山羊最易感染，而绵羊肺炎支原 体则可感染山羊和绵羊。本病常呈地方流行性，接触传染性很强，主要通过空 气-飞沫经呼吸道传染。阴雨连绵，寒冷潮湿，羊群密集、拥挤等因素，有利于 空气-飞沫传染的发生；多发生在山区和草原，主要见于冬季和早春枯草季节， 羊只营养缺乏，容易受寒感冒，因而机体抵抗力降低，较易发病，发病后病死 率也较高。本产品是根据 PCR 原理开发检测丝状支原体山羊亚种的试剂盒，它 具有下列特点： 

 

1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增丝状支原体山羊亚种，与其他微生 物没有交叉反应。 

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

丝状支原体山羊亚种PCR试剂盒规格及成分

编号	成分	规格
试剂一	PCR MagicMix 3.	1 mL（红盖）
试剂二	超纯水	1 mL（亮黄色））
试剂三	丝状支原体山羊亚种 引 物混合液	100 μL（白盖）
试剂四	丝状支原体山羊亚种 PCR 阳 性对照 （1×10E8 拷贝/μL）	50 μL（黄盖））
试剂五	使用手册	1 份

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。 

自备试剂 样品 DNA。
 

 

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳 性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 1 千倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此 作为 PC。另外用水作为 NC。

2. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数寄生虫 DNA 提取 试剂盒兼容。 

二、设置 PCR 反应（40μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分： 

成分	N+2个 样品管	PCR阴性对照	PCR阳性对照
PCR Magic Mix 3.0	各20 μL	20 μL	20 μL
丝状支原体山羊亚种 引物 混合液	各2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL
PCR 阴性对照（水）		18 μL	-
PCR 阳性对照（丝状支原体山羊亚种 PCR 阳性对照的 10000 倍稀释液）	-		18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR反应 （35个循环）	95℃	15 sec
	57℃	15 sec
	72℃	40 sec
最后延伸	72℃	7 min

 

 

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳 性对照必须有 551bp 大小的条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。

本试剂盒适用于各种 RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增。它采用AMV进行反转录反应，能够获得更长的反转录产物。同时，在20ul反转录体系和50ul PCR反应体系中，还可以一次性得到足够量的PCR产物用于后续的克隆实验。本试剂盒中配置的酶均为进口的酶。RT酶采用进口的AMV，所以cDNA更长，基因的信息保留得更完整！反转录过程中特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷，可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。
注意：
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！