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庚型肝炎病毒PCR试剂盒
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Hepatitis G Virus(HGV)
一年
上海康朗生物科技有限公司
负20度
50次
产品及特点
庚型肝炎病毒(Hepatitis G Virus,HGV)会引发肝炎,和乙型肝炎病毒相 似,主要经输血等非肠道途径传播,也可存在母-婴传播和医源性传播。单独感 染时临床症状不明显,一般不损害肝脏。主要特征有:过性病毒血症呈隐性感 染;急性肝炎 ALT 升高,黄疸比急性丙肝轻,多数很快恢复可与乙、丙肝病毒 合并感染;病毒持续存在病毒始终处于低滴度状态,少数高滴变,但常无临床 症状;病情迁延随着病毒滴度的波动,ALT 间歇性增高,少数反复发作转成慢 性肝炎;可能引起暴发性肝炎以亚急性重型肝炎多见;肝硬化感染病毒后演变 成肝硬化需较长时间,一旦硬化,病情即急转直下,发展迅速;肝癌少数换者 也可发展成肝癌,与乙、丙肝病毒有协同作用。该病毒对人体生命健康造成严 重损害,因此快速灵敏检测庚型肝炎病毒具有重要意义。本产品就是根据庚型 肝炎病毒保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量 PCR 产品,它具有下列特 点:
1. 即开即用,只需要提供病毒 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化,专一性强,只扩增庚型肝炎病毒,与其他病原没有交 叉反应。
3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次。
6. 本产品只能用于科研。
庚型肝炎病毒PCR试剂盒规格及成分
编号
成分
规格
试剂一
PCR MagicMix 3.
1 mL(红盖)
试剂二
超纯水
1 mL(亮黄盖)
试剂三
庚型肝炎病毒 PCR 引物混合液
100 μL(白盖)
试剂四
庚型肝炎病毒 (1×10E8 拷贝/μL)
50 μL(黄盖))
试剂五
使用手册
1 份
运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其 他试剂。
自备试剂 样品 DNA。
使用方法 一、样品 DNA 的制备
1. 如果有 N 个样品,必须设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳 性对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL 阳性对照的 1 千倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此 作为 PC。另外用水作为 NC。
2. 用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数寄生虫 DNA 提取 试剂盒兼容。
二、设置 PCR 反应(40μL 体系)
3. 对 N+2 个样品,在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照,故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分:
N+2个
样品管
PCR阴性对照
PCR阳性对照
PCR Magic Mix 3.0
各20 μL
20 μL
庚型肝炎病毒 PCR 引物 混合液
各2 μL
2 μL
PCR 阴性对照(水)
18 μL
-
PCR 阳性对照(庚型肝炎 病毒 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液)
4. 按下表设置 PCR 反应:
过程
温度
时间
预变性
95℃
5 min
PCR反应
(35个循环)
30 sec
55℃
72℃
20 sec
最后延伸
7 min
三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳 性对照必须有 551bp 大小的条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实 验无效。对没有扩增产物的样品,可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。本试剂盒适用于各种 RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增。它采用AMV进行反转录反应,能够获得更长的反转录产物。同时,在20ul反转录体系和50ul PCR反应体系中,还可以一次性得到足够量的PCR产物用于后续的克隆实验。本试剂盒中配置的酶均为进口的酶。RT酶采用进口的AMV,所以cDNA更长,基因的信息保留得更完整!反转录过程中特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷,可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。注意:1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。2. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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