乙型肝炎病毒前基因组RNA RT-PCR试剂盒
Hepatitis B Virus Pregenomic RNA(HBV pgRNA)
产品及特点
乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)是一种 RNA 病毒,会引起乙型 病毒性肝炎,是一种以肝脏病变为主的传染病。临床上以食欲减退、恶心、上腹 部不适、肝区痛、乏力为主要表现。部分患者可有黄疸发热和肝大伴有肝功能损 害,有些患者可慢性化,甚至发展成肝硬化,少数可发展为肝癌,对人体生命健 康造成严重损害,本产品根据 PCR 原理开发,可用于科研领域快速检测乙型肝 炎病毒前基因组 RNA。它具有下列特点:
1. 一站式,用于不需要单独准备每种成分,包括引物和对照。
2. 根据据乙型肝炎病毒前基因组RNA的保守基因序列设计的引物,具有良好的特异性。
3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。
4. 使用一管式 RT-PCR 技术,RT 和 PCR 两步在一个试管内完成,不需要中间 转移样品,降低了操作误差和可能的污染。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。
6. 本产品只能用于科研,不能用于临床。
乙型肝炎病毒前基因组RNA RT-PCR试剂盒规格及成分
编号 |
成 份 |
规格 |
试剂一 |
5×双酶一管式 RT-PCR Buffer |
200 μL(橘黄盖) |
试剂二 |
MMLV-Taq Mix |
75 μL(红盖) |
试剂三 |
超纯水 |
1 mL(亮黄盖) |
试剂四 |
乙型肝炎病毒前基因组RNA RT-PCR 引物 混合液 |
100 μL(白盖) |
试剂五 |
乙型肝炎病毒前基因组RNA RT-PCR 阳性 对照(1×10E8 拷贝/μL) |
50 μL(黄盖) |
试剂六 |
天净沙核酸释放剂(试用装) |
20 次(1mL,绿盖) |
试剂七 |
使用手册 |
1 份) |
运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分 分开放置,因为其容易污染其他成分,造成假阳性。
自备试剂 样品 RNA
使用方法 一、样品 RNA 的制备
1. 如果有 N 个样品,必须设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性 对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL 流行性出血热病毒 PCR 阳性对照的 100 倍稀释作为制备的阳性对照;用水作为制备的阴性对照。 制备所得成为样品 RNA。
2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提 取试剂盒兼容。
二、设置 RT-PCR 反应(20μL 体系)
3. 如果有 N+2 个样品,则标记 N+4 个 PCR 管(额外增加的两个管一个是 RT-PCR 阳性对照,另一个是 RT-PCR 阴性对照)并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分:
成分 |
样品 |
阳性对照 |
阴性对照 |
5×双酶一管式 RT-PCR Buffer |
各 4 μL |
4 μL |
4 μL |
乙型肝炎病毒前基因组RNA RT-PCR 引物混合液 |
各2μL |
2μL |
2μL |
N+2 个制备的样品 |
各12.5 μL |
|
|
乙型肝炎病毒前基因组RNA RT-PCR 阳性对照 的 100 倍稀释液 |
L |
|
12.5 μL |
MMLV-Taq Mix |
1.5 μL |
1.5 μL |
1.5 μL |
4. 上机进行 RT-PCR,RT-PCR 反应参数为:
过程 |
温度 |
时间 |
逆转录 |
42℃ |
30 min |
预变性 |
95℃ |
5 min |
PCR 反应 (35 个循环) |
95℃ |
30 sec |
53℃ |
30 sec |
72℃ |
20 sec |
延伸 |
72℃ |
7 min |
5. 琼脂糖电泳检测扩增效果。如果阴性对照有扩增产物或阳性对照无扩增产物, 则说明实验失败,需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有扩增产物、 阳性对照有 122bp 预期的扩增产物的情况下,才有必要分析样品的实验结果, 如果有扩增产物则为阳性,如果无则为阴性。
本试剂盒适用于各种 RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增。它采用AMV进行反转录反应,能够获得更长的反转录产物。同时,在20ul反转录体系和50ul PCR反应体系中,还可以一次性得到足够量的PCR产物用于后续的克隆实验。本试剂盒中配置的酶均为进口的酶。RT酶采用进口的AMV,所以cDNA更长,基因的信息保留得更完整!反转录过程中特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷,可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。
注意:
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!