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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
‘-20℃保存
- 保质期:
有效期一年
- 库存:
30
- 供应商:
上海康朗生物科技有限公司
- 规格:
50次
PCR使用方法:
2. 如果有 N 个样品,则需要进行 N+2 个样品提取,多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。如果用本试剂盒自带的 DNA 释放剂试用装。则按下面步骤操作:
3. 配制溶液 A 工作液。以配制 1mL 工作液(足够 10 个样品)为例:在一干净塑料
管中加入 10uL 溶液 A 成分一,20uL 溶液 A 成分二和 970uL 超纯水,充分混合均匀即可。溶液 A 工作液可室温放置,但最好在一周内用完,不要长期放置。一次检测一个样品需要 100uL 溶液 A 工作液,1mL 工作液足够 10 个样品。如果待测样品数量为其他数字,配制的溶液 A 工作液的体积需要做相应的调整。
4. 在标记好的 N+2 个离心管中,加入 1-5mg 固体样品(半粒芝麻大小,如奶酪)或5uL 液体样品(如牛奶)待测样品。在样品制备阳性对照中加入 5uL 阳性对照,在样品制备阴性对照中加入 5uL 水。
5. 在每个管中加入 100 uL 溶液 A 工作液,确保固体样品被溶液淹埋,如果是液体样品则震荡混匀。
6. 95℃保温 10 分钟。
7. 待冷却到常温后加入 10uL 溶液 B 并混匀得 DNA 释放液。每个样品得到的 DNA释放液足够进行 50-100 次 PCR。
二、设置 PCR 反应(40 uL 体系)
8. 在 N+2 个 PCR 管中加入下列成分,下面以样品数为 1 举例(注意:如果第一次使用DNA 释放剂,最好每个样品设置两个模板用量的 PCR 反应,两个反应的模板使用量差 10 倍,由此确定最佳用量,以后就用效果好的那个模板用量):
| 成份 | 样品(用量1) | 样品(用量2) | 阳性对照 | 阴性对照 |
| 即用型 PCR Mix 3.0 | 20 uL | 20 uL | 20 uL | 20 uL |
| PCR 引物混合液 | 2 uL | 2 uL | 2 uL | 2 uL |
| 制备的样品 | 18 uL | 2 uL | 无 | 无 |
| 样品制备阳性对照 | 不加 | 不加 | 2 uL | 不加 |
| 样品制备阴性对照 | 不加 | 不加 | 不加 | 2 uL |
| 超纯水 | 不加 | 16 uL | 16 uL | 16 uL |
9. 轻柔混匀后上机,按下面参数进行 PCR。
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 94℃ | 10分钟 |
| PCR 反应 (35 个循环) |
94℃ | 45s |
| 56℃ | 45s | |
| 72℃ | 45s | |
| 延伸 | 72℃ | 5分 |
10. 电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 121bp。阳性对照必须有此条带出现,阴性对照必须无任何扩增
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文献和实验流程和实验结果如下,给做RT-PCR 的战友一点参考。 首先引物设计 引物设计有3 条基本原则:首先引物与模板的序列要紧密互补,其次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构,再次引物不能在模板的非目的位点引发DNA 聚合反应(即错配)。 具体实现这3 条基本原则需要考虑到诸多因素,如引物长度(primer length),产物长度 (product length),序列Tm 值
以下操作按照天根产品 DP321 快捷型植物基因组 DNA 提取试剂盒的说明书进行,所有反应现象仅适用于该产品及本文所标明的样本量。如使用其它操作流程或产品,样本量不同可能现象与本文有所差异。实验准备:1. 植物叶片2. 研钵 液氮3. 移液器及配套无菌枪头(200 μl ,1ml),1.5 ml离心管4. 异丙醇,70%乙醇,干净吸水纸5. 涡旋振荡器,金属浴/水浴,台式离心机本文版权归天根生化科技(北京)有限公司所有,仅供个人学习使用,请勿转载
人VI型胶原蛋白(Collagen VI)ELISA试剂盒 说明书
上海西唐生物科技有限公司 021-55229872, 65333639 www.westang.com 人VI 型胶原蛋白 ( Collagen VI )ELISA 试剂盒 ( 用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内 ) 原理 本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA 法。用抗人 Collagen VI 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 Collagen VI
技术资料暂无技术资料 索取技术资料









