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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
‘-20℃保存
- 保质期:
有效期一年
- 库存:
30
- 供应商:
上海康朗生物科技有限公司
- 规格:
50次
PCR使用方法:
2. 如果有 N 个样品,则需要进行 N+2 个样品提取,多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。如果用本试剂盒自带的 DNA 释放剂试用装。则按下面步骤操作:
3. 配制溶液 A 工作液。以配制 1mL 工作液(足够 10 个样品)为例:在一干净塑料
管中加入 10uL 溶液 A 成分一,20uL 溶液 A 成分二和 970uL 超纯水,充分混合均匀即可。溶液 A 工作液可室温放置,但最好在一周内用完,不要长期放置。一次检测一个样品需要 100uL 溶液 A 工作液,1mL 工作液足够 10 个样品。如果待测样品数量为其他数字,配制的溶液 A 工作液的体积需要做相应的调整。
4. 在标记好的 N+2 个离心管中,加入 1-5mg 固体样品(半粒芝麻大小,如奶酪)或5uL 液体样品(如牛奶)待测样品。在样品制备阳性对照中加入 5uL 阳性对照,在样品制备阴性对照中加入 5uL 水。
5. 在每个管中加入 100 uL 溶液 A 工作液,确保固体样品被溶液淹埋,如果是液体样品则震荡混匀。
6. 95℃保温 10 分钟。
7. 待冷却到常温后加入 10uL 溶液 B 并混匀得 DNA 释放液。每个样品得到的 DNA释放液足够进行 50-100 次 PCR。
二、设置 PCR 反应(40 uL 体系)
8. 在 N+2 个 PCR 管中加入下列成分,下面以样品数为 1 举例(注意:如果第一次使用DNA 释放剂,最好每个样品设置两个模板用量的 PCR 反应,两个反应的模板使用量差 10 倍,由此确定最佳用量,以后就用效果好的那个模板用量):
| 成份 | 样品(用量1) | 样品(用量2) | 阳性对照 | 阴性对照 |
| 即用型 PCR Mix 3.0 | 20 uL | 20 uL | 20 uL | 20 uL |
| PCR 引物混合液 | 2 uL | 2 uL | 2 uL | 2 uL |
| 制备的样品 | 18 uL | 2 uL | 无 | 无 |
| 样品制备阳性对照 | 不加 | 不加 | 2 uL | 不加 |
| 样品制备阴性对照 | 不加 | 不加 | 不加 | 2 uL |
| 超纯水 | 不加 | 16 uL | 16 uL | 16 uL |
9. 轻柔混匀后上机,按下面参数进行 PCR。
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 94℃ | 10分钟 |
| PCR 反应 (35 个循环) |
94℃ | 45s |
| 56℃ | 45s | |
| 72℃ | 45s | |
| 延伸 | 72℃ | 5分 |
10. 电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 121bp。阳性对照必须有此条带出现,阴性对照必须无任何扩增
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文献和实验属于疱疹病毒科 a病毒亚科,病毒质粒大小约 180纳米。根据抗原性的差别目前把该病毒分为 1型和 2型。 1型主要由口唇病灶获得, 2型可从生殖器病灶分离到。感染是由于人与人的接触。从发生后四个月到数年被感染的人数可达人口总数的 50— 90%,是最易侵犯人的一种病毒,但在临床仅有一部份发病。此病可分为:口唇性疱疹、疱疹性角膜炎、疱疹性皮肤炎、阴部疱疹、卡波西病等,有时也是脑膜炎、脑炎的病因。口唇部疱疹一般较易诊断,同时因日晒、发热等种种的刺激因素而引起复发。该病毒可在鸡胚
1型) 单纯疱疹病毒2型(人类疱疹病毒2型) 水痘带状疱疹病毒(人类疱疹病毒3型) 巨细胞病毒(人类疱疹病毒4型) EB病毒(人类疱疹病毒5型) 人类疱疹病毒6型 人类疱疹病毒7型 神经节 腺体、肾 淋巴组织 淋巴组织 淋巴组织
、分娩、尿 单纯疱疹病毒(1与2型)、腺病毒、巨细胞病毒、人类免疫缺陷病毒、乙型肝炎病毒。 胎内(垂直)与产道感染 经胎盘或出生时经产道感染 风疹、巨细胞、单纯疱疹(2型)等病毒 [注]1.在出生后,个体之间的病毒传播,称为:水平传播(Horizontal transmission) 。例如通过呼吸道、消化道、经皮肤(虫媒)等途经传播。 2.通过胎盘,或于分娩时由母体传至胎儿的传播方式,称为垂直传播(Vertical transmission)。 根据病毒在体内的传播
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