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PhosphoWorks 比色
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12个月
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PhosphoWorks 比色ATP分析试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测ATP的试剂盒,三磷酸腺苷(ATP)在细胞能量,代谢调节和细胞信号传导中起着基本作用。它被称为细胞内能量转移的“货币分子单位”,以驱动活细胞中的许多过程和化学合成。 ATP也是细胞通讯的信号分子,在DNA和RNA合成中起重要作用。 AAT Bioquest提供了多种生物发光测定试剂盒,可通过重组萤火虫荧光素酶(目录号21610和21609)确定ATP的纳摩尔(nM)范围。这些试剂盒需要酶标仪,通常用于细胞活力或细胞毒性测定。 PhosphoWorks 比色ATP分析试剂盒基于一系列ATP诱导的酶偶联反应,产生过氧化氢,用我们的Amplite 红色底物在OD 570 nm处进行分光光度法定量。该测定法可在100 µL反应体积中检测到约3 µM ATP,而不受ADP和AMP的干扰。它为测定生物样品中的ATP水平提供了一种强大,简单且方便的测定方法。 PhosphoWorks 比色ATP分析是我们基于荧光素酶的ATP分析试剂盒的补充。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的PhosphoWorks 比色ATP分析试剂盒。
样品实验方案
简要概述
1.准备ATP工作溶液(50 µL)2.添加ATP标准液或测试样品(50 µL)3.在室温下孵育10-30分钟4.监测570 nm处的吸光度
溶液配制
1.制备储备溶液
所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样,并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。1.1Amplite 红色底物储备液(200X):将30 µL DMSO(组分E)加入小瓶AmpliteTM Red Substrate(组分A)中,制成200X AmpliteTM Red Substrate储备液。
1.2ATP标准溶液(10mM):将0.5 mL的ddH2O加入到ATP标准溶液(组分D)的小瓶中,制成10 mM ATP标准溶液。
2.制备标准溶液
ATP标准
将10 µL的10 mM ATP标准溶液添加到990 µL 1X PBS缓冲液中,以生成100 µM ATP标准溶液(AS7)。 取100 µM ATP标准溶液(AS7),并按1:2进行系列稀释,以用1X PBS缓冲液获得系列稀释的ATP标准溶液(AS6-AS1)。
3.制备工作溶液
3.1将5ml测定缓冲液(组分C)添加到酶混合瓶(组分B)中,并充分混合。
3.2将25 µL 200X Amplite Red Substrate储备溶液添加到Enzyme Mix瓶中,并充分混合以制成ATP工作溶液。
样品示例及操作
表1.透明底部96孔微孔板中ATP标准品和测试样品的布局。 AS = ATP标准品(AS1-AS7,1.56至100 µM),BL =空白对照,TS =测试样品。
表2.每个孔的试剂组成。
1.根据表1和2中提供的布局,准备ATP标准品(AS),空白对照(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25 µL试剂,而不是50 µL。
2.将50 µL ATP工作溶液添加到ATP标准液,空白对照和测试样品的每个孔中,以使ATP总测定体积为100 µL /孔。 对于384孔板,将25 µL ATP工作溶液添加到每个孔中,总体积为50 µL /孔。
3.避光保存,室温下孵育反应10-30分钟。
4.用吸光度板读数器在570 nm的OD值处监测吸光度的增加。
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