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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
仕诺达生物
- 库存:
999
- 样本:
血清,血浆,组织匀浆
- 标记物:
葡萄糖含量
- 适应物种:
葡萄糖含量
- 应用:
高校,中科院,研发单位
- 检测方法:
微量法
- 检测范围:
最低检测限为50nmol/g
- 规格:
48T/96T
微量法
注意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
规格: 100T/96S
产品内容:
试剂一:葡萄糖 9mg×1支,4℃保存;临用前加入1ml蒸馏水充分溶解为50μmol/mL 葡萄糖溶液,用蒸馏水稀释为 0.5μmol/mL 葡萄糖溶液 -20℃ 保存;试剂二:液体 10mL×1 瓶,4℃保存;
试剂三:液体 10mL×1 瓶,4℃保存;
产品说明:
葡萄糖不仅是细胞能量代谢的主要底物,而且其代谢中间产物是生物合成的重要底物。植物可通过光合作用产生葡萄糖。就哺乳动物而言,葡萄糖不仅是大脑神经系统、肌肉、脂肪组织等的唯一能源,而且与还原性辅酶、乳糖和乳脂的合成密切相关。
葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并产生过氧化氢;过氧化物酶催化过氧化氢氧化 4-
氨基安替比林偶联酚,生成有色化合物,在 505 nm 有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵和蒸馏水。操作步骤:
一、 葡萄糖提取:组织的处理:按照组织质量(g):蒸馏水体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织, 加入 1mL 蒸馏水),研磨成匀浆,95℃水浴 10 分钟(盖紧,防止水分散失),冷却后,8000g, 25℃离心 10min,取上清液备用。
细菌或细胞处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个): 蒸馏水体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 蒸馏水),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3S,间隔 10S,重复 30 次),95℃水浴 10 分钟(盖紧,防止水分散失),冷却后,8000g,25℃离心 10min,取上清液备用。
二、 测定步骤:
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 505nm,蒸馏水调零。2、 混合试剂的配制:使用前将试剂二和试剂三 1:1 等体积混合,用多少配多少。
3、 加样表(在 EP 管/96 孔板中加入下列试剂):
| 试剂(μL) | 空白管 | 标准管 | 测定管 |
| 样本 | 20 | ||
| 试剂一 | 20 | ||
| 蒸馏水 | 20 | ||
| 混合试剂 | 180 | 180 | 180 |
1、按样本蛋白浓度计算
葡萄糖含量(μmol/mg prot)=(C 标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(V1×Cpr)
=0.5×(A3-A1)÷(A2-A1)÷Cpr。
2、按样本鲜重计算
葡萄糖含量(μmol/g 鲜重)= (C 标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)
=0.5×(A3-A1)÷(A2-A1)÷W
3、按细菌或细胞密度计算
葡萄糖含量(μmol/ 104 cell)= (C 标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(500×V1÷V2)
=0.001×(A3-A1)÷(A2-A1)
C 标准:标准管浓度,0.5μmol/mL;V1:加入样本体积,0.1mL;V2:加入提取液体积,1mL;
Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g;500:细菌或细胞总数,500万。注意:最低检测限为50nmol/g 鲜重或0.5nmol/mg prot
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