- ￥3490
- 沪震生物
- HZ93-99021
- 中国
- 2025年07月10日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
88
- 英文名：
Rhizoma pinelliae
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海沪震实业有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50次
Rhizoma pinelliae
半夏(African Swine Fever、ASF)是由半夏(African Swine Fever Virus、ASFV) 引起猪的一种急性、热性、高度接触传染性疾病，病死率几乎高达100%，ASF最近在我国爆发，给我国养猪业造成重大损失，因此ASFV 的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用，为此本公司开发了简单快捷的 ASFV 可视化 LAMP 检测试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA。
2. 用 LAMP 恒温扩增法扩增 ASFV 特异片段，不需要荧光 PCR 等贵重仪器。 同时扩增时间只需要1小时，尤其适合现场或实验条件简陋的单位使用。
3. 检测灵敏性比PCR高10倍以上。
4. 特异性高，由于使用四条针对ASFV保守基因的特异引物，比使用2条引物的PCR专一性更高。
5. 提供无传染性的阳性对照，便于分析实验结果。
6. 每个反应的线性范围：10E2-10E7 拷贝/μL，最低灵敏度：10 拷贝/μL。
7.本试剂盒足够做50次 20μL体系的LAMP扩增。本产品只能用于科研。
规格及成分
| 成份 | 编号 | 十孔盒包装 |
| 2×可视化 UNG-LAMP MagicMix | 试剂一 | 500μL（绿盖） |
| 半夏 LAMP 引物混合液 | 试剂二 | 200μL（白盖） |
| 半夏LAMP阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL） |
试剂三 | 50μL（黄盖） |
| 使用手册 | 试剂四 | 一份 |
自备试剂：待测样品。
使用方法 一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化细菌样品 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容，包括本公司的一管式病毒DNAout或其升级版柱式病毒DNAout，可去公司的官网搜索。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个样品制备，包括一个样品制备阳性对
照（PC）和一个样品制备阴性对照（NC）。样品使用量根据所选择的试剂盒决定。如果样品使用量为XmL，则在XmL水中加10μLMRSA LAMP阳性对照的10000倍稀释液作为样品制备阳性对照，样品制备阴性对照是直接用X mL水作为阴性对照，然后和N个样品一起进行细菌DNA提取操作，得到N+2个DNA样品。
二、LAMP（20μL 体系）
3. 反应设置：如果有N+2个DNA纯化样品，则最好设置N+4个LAMP扩增，增加 LAMP阴性对照和阴性对照各1个。在N+4个PCR管中加入下列成分：
| 成分 | N+2个样品管 | LAMP阴性对照管 | LAMP阳性对照管 |
| 2 ×可视化 UNG-LAMP MagicMix |
各10μL | 10μL | 10μL |
| 半夏LAMP 引物混合液 |
各 4 μL | 4 μL | 4 μL |
| N+2 个样品 DNA | 各 6 μL | -- | -- |
| LAMP 阴性对照（水） | 6μL | ||
| LAMP 阳性对照（半夏LAMP阳性对照的 100倍稀释液） | -- | -- | 6μL |
5. 置于 25℃5 分钟（让 UNG 灭活可能的LAMP的污染），然后放 63℃扩增60 分钟。如果是在 PCR 仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴保温，没有热盖，必须在孔中加水以填充孔和管子间的空隙，并且在管中加50uL石蜡油，否则保温期间反应体系的水分会蒸发，影响反应效率）。
6. 80℃10 分钟灭活 Bst DNA 聚合酶和 UNG 酶。
7. 将反应管放置在白色背景（如白纸）前观察，观察反应液颜色并用手机照相留底。
8.实验结果分析。阳性对照将呈现蓝色，无模板的阴性对照将呈现无色或非常浅的蓝色，样品管的颜色如果接近阳性对照则说明有扩增，如果接近阴性对照则说明无扩增。标准的反应结果如下图（9号为阴性，10号为阳性，此处的9号和10号跟下步的电泳照片中的9号和10号是相同的两个样品）：
9.如果需要也可以电泳确认实验结果：取 10μL LAMP 扩增产物直接进行2%琼脂糖凝胶电泳（本产品不需要单独加 loading buffer），最好使用100 bpDNA Marker。如果样品为阳性，将会得到长度为 200bp 的梯形扩增产物。典型的电泳结果见下图（奇数样为阴性结果，偶数样为阳性结果。此处的9号和10号跟上步照片中的9号和10号是相同的两个样品）。
10. 注意消除环境污染，LAMP 产物易产生气溶胶，飘在空气中影响下一次实验，建议反应结束后，用紫外灭菌。先加好除阳性对照和样品以外的其它溶液，到另一个房间添加阳性对照及样品，可有效防止引物、MagicMix被污染。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
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文献和实验的，为此政府已建立了检测食品中转基因成分的体制。其中，最重要的是转基因检测方法的可靠性和有效性。所以我们利用分子生物学技术建立起一套基于PCR反应的实验方案，用于食品质控实验室的工作。最要害的是第一步：DNA提取，我们做了很严格的监控 。我们依据植物基因组和质粒DNA的提取效率来选择DNA提取试剂盒。整个提取过程包括破坏细胞壁、去除RNA和利用沉淀去除蛋白质，然后将DNA吸附在层析柱上，经过洗涤后再洗脱下来。类似的方法已经用于从其他一些植物和病毒中提取DNA。PCR反应的过程分为三个阶段：(1)通过加热
。 PCR扩增每个基因座的多态性区域是分析精子的第一步。两个基因座用两组引 物，同时引物必须位于多态性区域的边侧。当精子两个靶序列经PCR扩增，就确定了 每个基因座的等位基因成份。人工合成的寡核苷酸探针可识别等位基因小到仅发生单 个碱基置换的实验方法已得到改进，这些等位基因牧场划的寡聚物（ASO）探针第一 次应用是将人正常β珠蛋白基因中的正常βA等位基因与镰刀形红细胞（βA）的突变 区分开来。本方法检测等位基因需要人工合成的小片段寡核苷酸（典型的长19bp)。 每个寡核苷酸与一个等位
min左右后进行电泳。（3）溴化乙锭（EB）（10mg/ml）：在20ml水中加入0.2g溴化乙锭，磁力搅拌数小时。然后用铝箔包裹容器或将溶液转移至棕色瓶中，室温保存。（4）加样缓冲液（Loading Buffer）一般为6×Loading Buffer二、电泳鉴定时注意事项：佩戴一次性手套，避免皮肤接触EB。无路做胶还是电泳缓冲液尽量用新的，不要超过两周。三、电泳步骤1、50×TAE取10ml稀释成500ml，取50ml溶解0.5g琼脂糖。电炉上煮沸后加入EB 5ul。另外450ml TAE倒入
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