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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
88
- 英文名:
Raillietina echinobothrida
- 保质期:
一年
- 供应商:
上海沪震实业有限公司
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
50次
Raillietina echinobothrida
棘盘瑞氏绦虫(African Swine Fever、ASF)是由棘盘瑞氏绦虫(African Swine Fever Virus、ASFV) 引起猪的一种急性、热性、高度接触传染性疾病,病死率几乎高达100%,ASF最近在我国爆发,给我国养猪业造成重大损失,因此ASFV 的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用,为此本公司开发了简单快捷的 ASFV 可视化 LAMP 检测试剂盒,它具有下列特点:
1. 即开即用,用户只需要提供样品 DNA。
2. 用 LAMP 恒温扩增法扩增 ASFV 特异片段,不需要荧光 PCR 等贵重仪器。 同时扩增时间只需要1小时,尤其适合现场或实验条件简陋的单位使用。
3. 检测灵敏性比PCR高10倍以上。
4. 特异性高,由于使用四条针对ASFV保守基因的特异引物,比使用2条引物的PCR专一性更高。
5. 提供无传染性的阳性对照,便于分析实验结果。
6. 每个反应的线性范围:10E2-10E7 拷贝/μL,最低灵敏度:10 拷贝/μL。
7.本试剂盒足够做50次 20μL体系的LAMP扩增。本产品只能用于科研。
规格及成分
| 成份 | 编号 | 十孔盒包装 |
| 2×可视化 UNG-LAMP MagicMix | 试剂一 | 500μL(绿盖) |
| 棘盘瑞氏绦虫 LAMP 引物混合液 | 试剂二 | 200μL(白盖) |
| 棘盘瑞氏绦虫LAMP阳性对照 (1×10E8 拷贝/μL) |
试剂三 | 50μL(黄盖) |
| 使用手册 | 试剂四 | 一份 |
自备试剂:待测样品。
使用方法 一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化细菌样品 DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容,包括本公司的一管式病毒DNAout或其升级版柱式病毒DNAout,可去公司的官网搜索。
2. 如果有 N 个样品,则需要做 N+2 个样品制备,包括一个样品制备阳性对
照(PC)和一个样品制备阴性对照(NC)。样品使用量根据所选择的试剂盒决定。如果样品使用量为XmL,则在XmL水中加10μLMRSA LAMP阳性对照的10000倍稀释液作为样品制备阳性对照,样品制备阴性对照是直接用X mL水作为阴性对照,然后和N个样品一起进行细菌DNA提取操作,得到N+2个DNA样品。
二、LAMP(20μL 体系)
3. 反应设置:如果有N+2个DNA纯化样品,则最好设置N+4个LAMP扩增,增加 LAMP阴性对照和阴性对照各1个。在N+4个PCR管中加入下列成分:
| 成分 | N+2个样品管 | LAMP阴性对照管 | LAMP阳性对照管 |
| 2 ×可视化 UNG-LAMP MagicMix |
各10μL | 10μL | 10μL |
| 棘盘瑞氏绦虫LAMP 引物混合液 |
各 4 μL | 4 μL | 4 μL |
| N+2 个样品 DNA | 各 6 μL | -- | -- |
| LAMP 阴性对照(水) | 6μL | ||
| LAMP 阳性对照(棘盘瑞氏绦虫LAMP阳性对照的 100倍稀释液) | -- | -- | 6μL |
5. 置于 25℃5 分钟(让 UNG 灭活可能的LAMP的污染),然后放 63℃扩增60 分钟。如果是在 PCR 仪中保温,必须加热盖。如果用金属浴保温,没有热盖,必须在孔中加水以填充孔和管子间的空隙,并且在管中加50uL石蜡油,否则保温期间反应体系的水分会蒸发,影响反应效率)。
6. 80℃10 分钟灭活 Bst DNA 聚合酶和 UNG 酶。
7. 将反应管放置在白色背景(如白纸)前观察,观察反应液颜色并用手机照相留底。
8.实验结果分析。阳性对照将呈现蓝色,无模板的阴性对照将呈现无色或非常浅的蓝色,样品管的颜色如果接近阳性对照则说明有扩增,如果接近阴性对照则说明无扩增。标准的反应结果如下图(9号为阴性,10号为阳性,此处的9号和10号跟下步的电泳照片中的9号和10号是相同的两个样品):
9.如果需要也可以电泳确认实验结果:取 10μL LAMP 扩增产物直接进行2%琼脂糖凝胶电泳(本产品不需要单独加 loading buffer),最好使用100 bpDNA Marker。如果样品为阳性,将会得到长度为 200bp 的梯形扩增产物。典型的电泳结果见下图(奇数样为阴性结果,偶数样为阳性结果。此处的9号和10号跟上步照片中的9号和10号是相同的两个样品)。
10. 注意消除环境污染,LAMP 产物易产生气溶胶,飘在空气中影响下一次实验,建议反应结束后,用紫外灭菌。先加好除阳性对照和样品以外的其它溶液,到另一个房间添加阳性对照及样品,可有效防止引物、MagicMix被污染。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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文献和实验的敏感性。 五、丝虫病 应用丝虫成虫冰冻切片抗原作间接免疫荧光检查适用多种丝虫病免疫诊断。很有价值。如魏氏棘唇线虫抗体阳性率可达905。用作流行病学调查,可反映流行的准确情况。已用于盘尾丝虫、班氏丝虫、犬恶丝虫、广州管圆线虫等抗体的检测。 六、弓形虫病 已证实免疫荧光间接法检查弓形虫抗体,是一种诊断弓形虫病的特异和敏感的方法,阳性率可达98%。用死虫体作抗原很简便,检查IgM抗体可诊断新生婴儿先天性感染。 七、旋毛虫病 用旋毛虫冰冻切片作抗原,间接
蓝色。化学吸附(作用)在染色中应用,最早应用于金属染色剂(氯化金、硝酸银等)的金属与细胞内物质起化学作用,使金属在细胞内变成沉淀物或死亡物,显示细胞结构或物质。近年来此原理用于细胞酶化学染色。 ● 血细胞的染色多采用瑞氏染色和 姬姆萨 染色两种,但作者取其两种染色的优点,采用瑞氏和 姬姆萨 混合染色法,比单用一种染色法更佳。但近年来也出现一些快速和改良染色方法及染色液商品化,对血细胞形态染色不一定适用。 (二)瑞氏( Wright ' s staim ;美蓝-伊红Y)染色: 1 .瑞氏
多万种动物,绝大多数均属无脊椎动物,脊椎动物仅占较小部分,它是脊索动物门的一个亚门。动物学家近年趋向于把无脊椎动物分成 31门。国外有人还将西德格雷尔( Grell)教授于 1971年建立的扁盘动物门( Placozoa)和近年丹麦克里斯廷森( Kristensen)建立的铠甲动物门( Loricifera)包括在内,把无脊椎动物分为 33门。尽管动物物种千差万别,一般认为它们都是同一祖型的分支后代,有着一定远近的亲缘关系,是漫长的历史发展产物。 多数学者一致认为,所有动物
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