骨组织基因组DNA提取试剂盒
中文名:骨组织基因组DNA提取试剂盒
英文名:Bone tissue gDNA Extract kit
CAS:N/A
级别:N/A
分子量:N/A
分子式:N/A
纯度:N/A
储存条件:RT
(一)样品处理:
1. 骨粉的制备:用自备酒精将骨骼表面擦洗干净,以防污染物对后续 PCR的影响,然后用骨钻在处理干净的骨骼区域钻取骨粉。
2. 如果样品是骨粉成品或商品化骨粉,可以不作处理。
(二)样品裂解纯化:
1.称取 0.2 g 骨粉,转移到 2 mL 塑料离心管中。
2. 加入 1 mL 裂解液I ,充分震荡混匀。
注意:裂解液I 在 4℃ 放置后会析出,使用前请 65℃水浴溶解摇匀后再取用。骨粉加裂解液I 后会很黏稠,需充分震荡混匀。
3. 65℃水浴放置 30 min以上。
4. 加入 0.3 mL 纯化液II 和 0.2 mL 的氯仿(自备),充分震荡混匀。
5. 12,000 rpm 离心 3 min,小心将上清液转移到一个新的离心管中。
(三)DNA收集:
1. 在步骤(二)所得的上清中加入 0.5 mL 结合液III,颠倒混匀。分两次转移到吸附柱中,每次上柱后均先室温放置 2 min,然后 12,000 rpm 离心 1 min,弃穿透液。
2. 在吸附柱中加入500 μL洗涤液,12,000 rpm离心1 min,弃穿透液。重复洗涤一次。
3. 再将吸附柱12,000 rpm离心30 s以甩干乙醇。
4. 将吸附柱放入一个干净的1.5 mL离心管中。在吸附柱中央加入50 μL洗脱液(65-70℃预热),室温静置2 min。12,000 rpm离心2 min。将穿透液重新加入吸附柱中央,12,000 rpm离心1 min以洗脱更多DNA。
5. 检测DNA质量。将所得的DNA保存于-20ºC。
(四)实验建议:
1. 骨粉制备是很关键的步骤,需要将骨骼充分研磨成粉状。
2. 所得的DNA分子量不均一,电泳会呈弥散条带,一般在100 bp—20 Kb 之间,跟骨组织新鲜程度,骨粉的加工方法等有关。
3. 所得DNA经充分纯化,可以直接用于PCR 以及qPCR 等实验。
4. 如DNA产量较低,建议增大样品处理量(相应增加试剂用量)。
注意:如提取量扩大2-3倍(0.4-0.6g骨粉),可以将与结合液III混合的上清分4-6次转移到同一个吸附柱中,可以提高DNA的浓度。
如提取量扩大10倍(2g骨粉),超过吸附柱纯化范围。可以在(二)样品裂解纯化 之后取上清,用异丙醇或者乙醇沉淀法沉淀DNA,用75% 乙醇洗涤沉淀,后用TE溶解DNA(DNA产量比较高,纯度和吸附柱纯化方式相比稍差)。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!