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ABI 7500 Fast/Stepone, Bio-Rad CFX96 Roche 480,Roche Nano
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上海研卉生物科技有限公司
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ABI 7500 Fast/Stepone, Bio-Rad CFX96 Roche 480,Roche Nano
无DNA酶和RNA酶,无DNA和RNA
超薄均匀型管壁与产品均一性依靠顶级的精密模具实现
超薄壁技术提供极佳的热传导效应, 促使样品最大化地实现扩增
有方向孔,易于辨别方向
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文献和实验: mycoplasma DNA ( A. laidlawii ; M. pirum ) 3.1.1.3 Negative control : ddH2O 3.1.2 Reaction mixture ( 23 ul / each ) 3.1.2.1 10x PCR buffer (含1.5 mM MgCl2 ) 2.5 ul 3.1.2.2 1st stage primer mixture 0.5 ul 3.1.2.3 dNTP ( 1.25 mM each ) 1.0 l 3.1.2.4 MgCl
4连接酶把PCR片断连接到T载体上,而Topo TA Cloning用的是DNA Topoisomerase。Topoisomerase的用途一般使用在复制DNA前把超螺旋DNA切割使之解旋后,再连接成线性DNA。Topo TA克隆即使用Topoisomerase高效连接的特性把含3`A端的PCR扩增片断快速连接到3`T端载体上,整个反应只需五分钟!一般T4连接酶需过夜才能高效连接。Topo TA克隆系统提供Topoisomerase I载体,感受态细胞,SOC培养基等。1. Add 1ml of TOPO®
片段。 3.目的片段的克隆 纯化的片段连接到克隆载体pGEM-Tvector,转化导入宿主菌E.coliDH5α,通过蓝白斑筛选,PCR扩增鉴定后测序,获得的含所需要的目的片段的质粒。 (1)pGEM®-TEasy载体系统 I.描述 pGEM®-TEasy载体系统可用于PCR产物的克隆。这种载体是通过EcoRⅤ酶切pGEM®-5Zf(+)和pGEM®-TEasy载体,并在3’末端加入胸腺嘧啶构建的。插入位点3’-T突出端可提高PCR产物的连接效率,因为3’-T突出端可以防止载体的自身环化,并且为
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