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ABI 7500 Fast/Stepone, Bio-Rad CFX96 Roche 480,Roche Nano
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上海研卉生物科技有限公司
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125条/盒
ABI 7500 Fast/Stepone, Bio-Rad CFX96 Roche 480,Roche Nano
无DNA酶和RNA酶,无DNA和RNA
超薄均匀型管壁与产品均一性依靠顶级的精密模具实现
超薄壁技术提供极佳的热传导效应, 促使样品最大化地实现扩增
有方向孔,易于辨别方向
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文献和实验IPTG溶于100ml ddH2O中,0.22μm滤膜抽滤,-20℃保存。 二、操作步骤 (一)获得目的基因 1、通过PCR方法:以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),PCR循环获得所需基因片段。 2、通过RT-PCR方法:用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA,以mRNA为模板,逆转录形成cDNA第一链,以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。 (二)构建重组表达载体 1、载体酶切:将表达质粒用限制性内切
1mlTRIzol加0.3ml无水乙醇混匀,室温放置3分钟,2~8℃不超过2000×g离心5分钟。 2. 移去上清,(如需分离蛋白质,可保留,进一步操作见后)用含10%乙醇的0.1M柠檬酸钠洗涤DNA沉淀。每用1mlTRIzol加入1ml柠檬酸钠,室温放置30分钟,2~8℃2000×g离心5分钟,弃上清,重复一次。 3. 用75%乙醇再洗一遍DNA沉淀,每用1ml TRIzol加入1.5~2 ml75%乙醇,室温放置10~20分钟(不时颠倒混合)2~8℃2000×g离心5分钟, 弃上清。 4. 室温放置晾干
: mycoplasma DNA ( A. laidlawii ; M. pirum ) 3.1.1.3 Negative control : ddH2O 3.1.2 Reaction mixture ( 23 ul / each ) 3.1.2.1 10x PCR buffer (含1.5 mM MgCl2 ) 2.5 ul 3.1.2.2 1st stage primer mixture 0.5 ul 3.1.2.3 dNTP ( 1.25 mM each ) 1.0 l 3.1.2.4 MgCl
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