a. 对于细胞或组织样品,固定后,适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色,则先进行免疫荧光染色,染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst 33342染色。如果不需要进行其它染色,则直接进行后续的Hoechst 33342染色。
b. 对于贴壁细胞或组织切片,加入少量用免疫染色洗涤液、PBS或生理盐水稀释至1×的本产品,覆盖住样品即可。对于悬浮细胞,至少加入待染色样品体积3倍的1×染色液,混匀。室温放置3-5分钟。
c. 吸除Hoechst 33342染色液,用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次,每次3-5分钟。
d. 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时,会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染,或呈碎块状致密浓染。
2. 对于活细胞或组织:
a. 对于培养器皿内的活细胞或组织,在培养液中均匀滴加适量的Hoechst 33342活细胞染色液(100×)至终浓度为1×,轻柔混匀。例如对于十二孔板中培养的细胞,每孔有1ml的培养液,每孔需要加入10μl Hoechst 33342活细胞染色液(100X)。培养液中的血清、酚红等都不会对染色产生干扰。
b. 在适宜于细胞培养的温度培养20-30分钟。弃染色液,用PBS或培养液洗涤2-3次即可进行荧光检测。