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1M山梨醇溶液/酵母电转感受态
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1M山梨醇溶液/酵母电转感受态细胞制备液
RT
上海泽叶生物科技有限公司
一年
100ml
中文名:1M山梨醇溶液/酵母电转感受态细胞制备液
英文名:1M Sorbitol Solution
CAS:N/A
级别:N/A
分子量:N/A
分子式:N/A
纯度:N/A
储存条件:RT产品简介
1M的山梨醇一般用于酿酒酵母或者裂殖酵母电转感受态的制备。
酵母感受态细胞的制备:
1.活化菌种。-80℃保存的菌种在固体YPDA培养基(YPDA加20g Agar/L)上划线,在30℃培养2-4天。
2.挑取酵母单菌落在固体YPDA培养基上划3-5 mm的短线,在30 ℃培养2-4天。待酵母单菌落长至2 mm长时,接种。
3.首先把酵母细胞接种到50 ml液体YPDA培养基的三角瓶中继续培养,待OD600到1.3-1.5范围内。
4.将酵母菌置于冰上放置10 min后,收集细胞。1000 g,离心5 min, 去上清。
5.沉淀用30-50 ml的预冷的无菌水悬浮。1000 g,离心5 min,去上清。重复洗涤2次。
6.沉淀用5mL 冰上预冷的1M 山梨醇溶液重悬。1000 g,离心5 min,去上清。
7.沉淀用0.4 mL 的预冷的1M 山梨醇溶液重悬,按照40 uL 分装。
酵母转化:
1.在40uL 的酵母感受态细胞中,加入5uL(100ng)的质粒,混匀。
2.转移到预冷的电转槽中,电击。
3.在电转槽中加入500uL 预冷的1M 山梨醇溶液,轻柔混匀。
4.涂布于相应的筛选培养基上,28-30℃培养3-5天。特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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