产品描述:T4 RNA ligase 1是ATP依赖的连接酶,底物作用范围较广,包括单链RNA、DNA、寡核糖核酸链、寡脱氧核糖核酸链和各种各样的核酸衍生物。该酶催化5'-磷酸和3'-OH形成磷酸二酯键。
来源:重组大肠杆菌
规格:10U/μL
活性单位定义:1单位活性定义为在20μL 1X T4 RNA Ligase Buffer 中,37℃、30分钟内,将0.4μg等摩尔比的两条23bp单链的RNA(其中一条是5'-磷酸化的)进行连接,连接50%所用的酶量。
酶存储缓冲液:10mM Tris-HCl (pH7.5, 25℃), 0.1mM EDTA, 500mM KCl, 1mM DTT, and 50% (v/v)Glycerol.
配套溶液:10X T4 RNA Ligase Buffer, Cat#ON-111, 500mM Tris-HCl pH7.8, 25℃, 100mM MgCl2, 10mM ATP, 100mM DTT.50% PEG 8000, Cat#ON-112, 50% PEG 8000(w/v)
相关产品推荐:10X T4 RNA Ligase Buffer, Cat#ON-111; Ribonuclease inhibitor, Cat#ON-039; 50% PEG 8000, Cat#ON-112
操作要点:
实验操作:用于单链RNA的连接
1. 在反应管中按下列顺序添加响应试剂:
Donor RNA |
40-200pmol |
Acceptor RNA |
20pmol |
10X T4 RNA Ligase Buffer |
2μL |
Ribonuclease inhibitor (40U/μl) |
0.5μL |
PEG 8000, 50% |
8μL |
T4 RNA ligase 1(10U/μL) |
1μL |
Nuclease-free H2O |
to 20μL |
注意事项:Donor RNA 必须要含有5'-磷酸基团,Acceptor RNA 必须要含有3'-OH基团;
2. 将反应液37℃保温30分钟或16℃保温16小时;
3. 添加EDTA至11mM可以终止反应。
储藏温度:-20℃
质控检测:无DNase、RNase污染
纯度:SDS-PAGE纯度:大于95%
参考文献:
1. Thomas J. Snopek, William B. Wood, M. Patricia Conley, et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 74, 3355–3359 (1997).
2. Robert Silber, V.G. Malathi, and Jerard Hurwitz. Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 69, 3009-3013(1972).
3. Uhlenbeck, O.C. and Gumport, R.I. (1982) In: The Enzymes, Boyer, P.D., ed., Academic Press, New York, NY.
4. Romaniuk, P.J. and Uhlenbeck, O.C. (1983) Joining of RNA molecules with RNA ligase. Methods Enzymol. 100, 52–9.