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文献和实验/cm2种入25cm2培养瓶,放入孵箱培养。以后每隔2~3d进行全量换液。 摇床振摇分离星形胶质细胞和寡突胶质细胞 培养至7~10天,换液后放入孵箱继续培养24h,取出拧紧培养瓶盖,于37℃恒温摇床上280r/min摇动18h。此时寡突胶质细胞90%以上在培养悬液内而与瓶底贴壁的星形胶质细胞分离。 分离培养悬液内的寡突胶质细胞 吸出悬液至离心管内950r/min离心10min,弃上清后管内加入新鲜GM,吹打成单细胞悬液,按1.5×105/cm2种入预先用100μg/L多聚赖氨酸包被好的35
培养液,每瓶所含下列试剂: RPMI 1640或199 90% 小牛血清 10% PHA(自制) 0.1ml 3% 肝素 10u/ml 2% 双抗 100u/ml(选择) 分装于10ml培养瓶内,每瓶5ml培养液,封口置冷藏柜备用。 3、操作过程 (1)采样接种:用2.5%碘酒、75%酒精消毒瓶盖,用酒精灯火焰过烤,无菌条件下抽取患者外周血0.5-1ml,每瓶加20滴左右,轻摇均匀,尽量避免培养物与瓶盖接触; (2)培养:置36℃培养箱中培养72小时,每隔12小时左右轻遥1次
可能原因 (1)CO2 张力不对。 (2)培养瓶盖拧得太紧。 (3)NaHCO3 缓冲系统缓冲力不足。 (4)培养液中盐浓度不正确。 (5)细菌、酵母或真菌污染。 建议解决方法 (1)按培养液中NaHCO3 浓度增加或减少培养箱内CO2
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