1000µl蓝色枪头盒

免疫共沉淀实验指南

或 4℃过夜以捕获免疫沉淀复合物。 离心（3000 rpm，5 min）收集 Agarose 珠子，弃掉上清，用 800 µL-1000µL 预冷的 PBS 缓冲液洗涤珠子 3 次。（小心吸取上清，避免触碰底部珠子） 收集沉淀，加 60 µL 2×SDS 蛋白上样缓冲液中重悬沉淀，轻混均匀后煮沸 5 min，12000 rpm 离心 10 min。 将上清转移至一新离心管，进行 Western 检测。

大肠杆菌感受态细胞的制备、重组DNA的转化、克隆筛选

min离心10min（从这一步开始，所有操作均在冰上进行，速度尽量快而稳）；(3) 倒净上清培养液，用1ml冰冷的0.1mo1／L CaCl2溶液轻轻悬浮细胞，冰浴；(4) 0～4℃，4000r／min离心10min；(5) 弃去上清液，加入500µll冰冷的0.1mo1／L CaCl2溶液，小心悬浮细胞。0～4℃，4000r／min离心10min；(6) 弃去上清液，加入100µl冰冷的0.1mo1／L CaCl2溶液，小心悬浮细胞，冰上放置片刻后，即制成了感受态细胞悬液；(7) 制备好的感受

RNA-biotin based pulldown assays for the detection of siRNA targeted genomic regions and siRNA directed histone modifications (PROT32)

so that there are no clumps of cells. Incubate on ice for 10 minutes;Centrifuge at 5,000 rpm for 5 minutes at 4°C to pellet the nuclei;Re-suspend nuclei in 600µl of ChIP lysis buffer+1/1000 PMSF+50 units of RNAse inhibitor and incubate on ice for 10 minutes; Sonicate