1.哺乳动物无核红细胞全血 (1)实验操作前请将10X红细胞裂解液用无菌水稀释到1X,如1ml的10X红细胞裂解液中加入9ml无菌水。 (2)在1.5ml EP管中加入600μl的1X红细胞裂解液,向红细胞裂解液中加入100μl抗凝全血,上下颠倒混合均匀,室温放置2min,13000rpm离心2min,倒掉上层红色液体,留取底部白细胞层。 (3)再次加入400μl的1X红细胞裂解液,上下颠倒5~10次。13000rpm离心1min,倒掉上层红色液体,留取底部白细胞层。 (4)通常底部残留40μl液体,漩涡震荡(或枪头吹打)重悬白细胞层,至无块状物。加入20μl DA Blood Solution,漩涡5s混合均匀。并置于75°C水浴中放置10min。孵育完毕后加入10μl DB Blood Solution,漩涡5s混合均匀,即可用于下游PCR扩增。通常每50μl PCR体系加入1μl制备的该基因组DNA即可。
2.禽类有核红细胞全血 (1)直接取2.5μl抗凝禽血加入到47.5μl水中,漩涡5s混合均匀。 (2)加入20μl DA Blood Solution,漩涡5s混合均匀。并置于75°C水浴中放置10min。孵育完毕后加入10μl DB Blood Solution,漩涡5s混合均匀,即可用于下游PCR扩增。通常每50μl PCR体系加入1μl