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大量
- 英文名:
Arabidopsis thaliana nutrient salt mixture solution
- 保质期:
一年
- 供应商:
上海信裕生物科技有限公司
- 保存条件:
RT
中文名:拟南芥营养液(干粉+浓缩液)
英文名:Arabidopsis thaliana nutrient salt mixture solution
CAS:N/A
级别:N/A
分子量:N/A
分子式:N/A
纯度:N/A
储存条件:RT,密封保存
产品简介信裕生物出品的拟南芥营养液(干粉+浓缩液)(NSP1060),也有实验室称为PNS营养液,分为干粉和浓缩液两个部分,称取0.36g干粉溶解于1L蒸馏水中,完全溶解后再加入1mL钙浓缩液,混匀即为pH值5.7的营养液,无需调整pH值。该产品易储存运输,配置方便快捷。
英文名称:Arabidopsis thaliana nutrient salt mixture
产品性状:白色至淡黄色粉末
工作浓度:水溶解,干粉359.295mg/L,加1ml/L 1000×钙浓缩液。
运输条件:常温运输
储存条件:2-8℃,密封储存
特别说明:该产品不适宜制备高浓度母液,会有沉淀产生。
产品组成:(mg/L)

使用方法:
1.根据用量,称取干粉混合物加入相应体积的蒸馏水内,完全溶解后加入适量钙浓缩液,混匀。
2.本品配制完成后pH为5.7±0.2,无需调整。如有特殊要求,可根据要求调整pH值。
3.施入配制好的营养液。
注意事项:
1.大量元素低温储存可能会有析出情况,恢复常温完全溶解即可使用。
2.三种母液不要同时加入,避免产生沉淀。
拟南芥培养方法:
拟南芥生长的适宜温度白天为22℃-24℃,夜温20-22℃,适宜的湿度为60-70%,生长期适宜的光强为150μmol• S-1• M-2(6支36 W日光灯下35cm处测得)。幼苗期不耐高光强,可适当遮荫。光质也较重要,应选用植物生长专用的日光灯。拟南芥属于长日照植物,在日照长于12小时下才会开花,一般拟南芥生长室的日照长度定于14-16h为佳。
1.准备育苗培养基:2.29 g/L 1/2 MS(PM1061),Sucrose(CS10581):10 g/L,pH5.7,Agar(CA1331):0.7-0.8 %.121℃灭菌15分钟,60℃左右在超净台内分装入直径100mm培养皿(25 mL)。
2.种子消毒:种子放在1.5mL离心管中,加入1 mL的种子消毒液(2% NaClO(市售10%溶液)和0.1% Triton-X100),消毒10 min(移液器反复吸吹),用无菌水洗5次以上(移液器反复吸吹)。
3.点种:种子里可多加些水,用移液器吸取种子,均匀铺到培养皿上,可根据需要选择种植的密度(一般不超过30株,不要太密,否则根缠在一起不好移苗),用移液器吸除培养基表面上的水,并置于超净台内吹干培养皿表面上的水,密封盖子,4℃暗处理两天后(春化),移到光照培养箱(22 ℃,光周期12 h),两周后再移苗。若种子较密,光照培养箱中生长1周则要移苗,且需适当遮荫。
4.移苗:将蛭石与珍珠岩按3:1的比例混好作为基质,装入营养钵,将营养钵放入不透水的平底塑料育苗盘,在育苗盘中加水至3 cm高,水就会通过营养钵的底孔渗入,待基质湿透即可移苗。用镊子轻轻从培养皿中连根拉出小苗,把根平放在蛭石表面,用镊子把根轻轻压入基质内,移苗后用保鲜膜覆盖营养钵3-4天。从苗期直至开花,每隔2-3天浇一次水,始终保持育苗盘内有1-3 cm的水层,整个生长期浇3-4次拟南芥营养液(NSP1060)。在收种期,不要浇水,保持育苗盘干燥。
5.收种:在种荚变黄,变干时收种。将种子抖落容器内,收集后用筛网除去杂质,将种子装入小纸袋中,标记好,置于干燥的环境中待种子进一步干燥后,封存于1.5mL离心管。
拟南芥的转化方法:
渗透培养基配制:2.29g/L 1/2MS(大量元素减半);5% 蔗糖;0.5% MES;用KOH调至pH5.7;再加:10 μl/L的6-BA母液(1 mg/mL,乙醇溶解);200 μl/L Silwet L-77(在蔗糖溶解后加入,否则蔗糖很难溶解)。经转化的拟南芥,种子收获后需在相应的抗性平板上筛选转化子。
1、制备好已转化了相应质粒的农杆菌菌液10 mL,转入200 mL大瓶过夜培养,农杆菌液OD600在1.2-1.6即可。
2、室温5000 rpm离心15分钟。
3、弃上清,将农杆菌沉淀悬浮于相应体积的渗透培养基里,OD600在0.8左右为宜。
4、直接将拟南芥的花浸入农杆菌悬浮液,持续几秒钟,取出再浸入,反复3-5次。浸染后的植株平放在带有盖子的育苗盘中,或者用保鲜膜盖好,以保持湿度。移入恒温室避光培养24小时,第二天揭膜,正常光照培养。
转化子的筛选:
1、种子消毒:用种子消毒液(2% NaClO和0.1% Triton-X100)处理10分钟(移液器反复吸吹);然后用无菌水洗5次(移液器反复吸吹)。
注意:消毒时间不宜过长,否则影响种子发芽。
2、处理后的种子用移液器均匀涂布在固体筛选培养基表面。不宜过密,切忌将种子堆叠在一起。如种子特别容易污染,可在固体筛选培养基中加入工作浓度为250 μg/mL的头孢霉素(SL4090)抑制农杆菌的生长。
3、4℃避光春化2到3天,移入22℃恒温箱培养。
4、观察种子在固体筛选培养基上生长情况, 相比于其他萌发的幼苗,具有长根的幼苗可确定为转化子时,将转化子移栽至浇透拟南芥营养液(NSP1060)的人工基质上培养。
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文献和实验步骤 1. 将拟南芥种子种于浇过饱和PNS营养液的人工土中,当年收获的种子种植后4o C春化72h,隔年种子种植后春化24h.然后转入人工培养室中在相对湿度80%,恒温20-24o C,光照强度80-200umo1/M2 /S,光照周期为8h黑暗、16h光照培养。 2. 拟南芥的垂直培养: 将拟南芥的种子首先用70%的乙醇处理2分钟,再用稀释10倍的次氯酸钠溶液,加一滴吐温40(每50毫升1滴),处理15分钟,其间不断的悬浮种子以保证消毒彻底。然后用无菌
·5H 2 O 0.08 H 2 MoO 4 ·H 2 O 0.02 3.每升培养液中加入1 mL FeEDTA溶液(即乙二胺四乙酸铁 盐溶液 )。 通常应当先配出各种盐类的浓缩液。注意避免浓缩液中出现沉淀。使用时按一定的比例加水稀释到要求的浓度。采用循环供液时,营养液中的矿质元素被植物体吸收后,应当及时进行调节,使营养液仍旧符合原配方的要求。 营养液
0.02 3.每升培养液中加入1 mL FeEDTA溶液(即乙二胺四乙酸铁盐溶液)。 通常应当先配出各种盐类的浓缩液。注意避免浓缩液中出现沉淀。使用时按一定的比例加水稀释到要求的浓度。采用循环供液时,营养液中的矿质元素被植物体吸收后,应当及时进行调节,使营养液仍旧符合原配方的要求。 营养液的特点 任何一种营养液都应当具备以下三个特点。第一,包括所有的必需的矿质元素。对某些植物还可以增加有关的元素。例如,禾本科植物的营养液中可以加入适量的Si。第二,是均衡的营养液,也就是矿质
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