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- 信裕生物
- XYXYT0003
- 中国
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Carrier DNA
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海信裕生物科技有限公司
- 保存条件：
-20°C
- 规格：
瓶
中文名:Carrier DNA/鲑鱼精DNA （10mg/ml，用于酵母转化）
英文名:Carrier DNA
CAS:N/A
级别:N/A
分子量:N/A
分子式:N/A
纯度:N/A
储存条件:-20°C
产品简介Carrier DNA (鲑鱼精DNA) 为短的线形单链DNA，可包裹质粒DNA，在酵母细胞摄取外源质粒DNA过程中发挥作用，促进质粒进入酵母细胞，另外还可保护质粒免于被DNA酶降解。在每次使用前务必进行两次热变性，保证Carrier DNA在转化实验体系中以单链形式存在。
初次使用Carrier DNA，请把装有Carrier DNA的管子在沸水中煮沸5 min，然后立即放在冰上，用后放在-20℃储存备用。下次使用时请在冰上解冻Carrier DNA。
酵母感受态细胞的制备：
1.活化菌种。-80℃保存的菌种在固体YPDA培养基（YPDA加20g Agar/L）上划线，在30℃培养2-4天。
2.挑取酵母单菌落在固体YPDA培养基上划3-5 mm的短线，在30 ℃培养2-4天。待酵母单菌落长至2 mm长时，接种。
3.首先把酵母细胞接种到3 ml液体YPDA培养基中，30℃过夜培养。
4.第二天转接到含有30 ml液体YPDA培养基的三角瓶中继续培养，待OD600到0.4-0.5范围内。收集细胞，1000 g，离心5 min, 去上清。
5.沉淀用30-50 ml的无菌的去离子水悬浮。1000 g，离心5 min，去上清。
6.沉淀用合适体积的100 mM LiAc悬浮（30 ml的酵母菌最多用不超过1 ml的100 mM LiAc悬浮，通常100 μl的酵母细胞用于转化一个质粒，即一个反应）。
7.把酵母细胞的悬浮液分装到1.5 ml的离心管中，每管分装100 μl，用于转化一个质粒即一个反应。1000 g，离心5 min，去上清。制备好的感受态细胞备用。
酵母转化：
1.配制预混液，每转化一个质粒即一个反应需要360 μl的预混液。
2.吸取360 μl的预混液加入到感受态细胞中，用枪头反复吹吸沉淀，使离心管底的酵母细胞彻底地悬浮在含有PEG的预混液中。
3.放置在30 ℃的水浴锅中孵育30 min，每10 min混匀一次。
4.放置在42 ℃的水浴锅中热击30 min，每10 min混匀一次。
5.12000 rpm，离心1 min，去掉上清液。
6.沉淀中加入100 μl的无菌的去离子水，悬浮沉淀。
7.把酵母细胞涂到相应的酵母培养基平板上，30℃培养2-4天。
注意事项：
1. 初次使用Carrier DNA，请把装有Carrier DNA的管子在沸水中煮沸5 min，然后立即放在冰上，用后放在-20℃储存备用。下次使用时请在冰上解冻Carrier DNA。
2. PEG溶液在低温环境下会析出，请于常温环境下完全溶解后使用。
3. 转化全程要无菌操作。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验) corresponds to about 50µg/ml of chromatin DNA. So the yield of chromatin (in µg) is given by A260 x dilution factor x volume x 50; Centrifuge sample (800 x g for 10 minutes at 4°C) and resuspend pellet to a chromatin DNA concentration of 0.5mg/ml
液（8 cm × 8 cm 的膜加 5 mL 即可），将膜的背面贴紧杂交瓶壁，正面朝向杂交液。放入 42 ℃ 杂交炉中，使杂交体系升到 42 ℃。取经超声粉碎的鲑鱼精 DNA（已溶解在水或 TE 中）100 ℃ 加热变性 5 min，迅速加到杂交瓶中，使其浓度达到 100 μg/mL。继续杂交 4 hr。鲑鱼精 DNA 的作用是封闭 NC 膜上没有 DNA 转移的位点，降低杂交背景、提高杂交特异性。2．杂交倒出预杂交的杂交液，换入等量新的已升温至 42 ℃ 的杂交液，同样加入变性的鲑鱼精 DNA。将探针
Yeast Transformation Using Frozen Competent Cells and Single-stranded DNA as a Carrier
Yeast Transformation Using Frozen Competent Cells and Single-stranded DNA as a Carrier Katherine Kolor References: Schiestl and Gietz (1989) Curr. Genetics 16:339-346 Gietz, et al (1995) Yeast 11:355-360
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