取1μg dUTP PCR产物,用UNG 37℃消化30min后进行琼脂糖凝胶电泳。 Lane 1:对照(不加UNG酶);Lane 2-7:分别为 2U、0.5U、0.125U、0.032U、0.008U、0.002U UNG酶37度消化30min后的PCR产物;M:D2000 DNA Marker。
性能测试
UNG在标准PCR体系下(50ul体系)性能测试。 处理方法为:在反应体系中分别加入不同量的UNG(如图所示),50度2min,95度5min,然后进入PCR循环扩增,扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳。Lane 1-3:标准dNTP Mixture,UNG用量0.25U/0.5U/1U; Lane 4-6:dNTP/dUTP Mixture,UNG用量0.25U/0.5U/1U;M:D10000 DNA Marker。
反应buffer
Uracil DNA Glycosylase (UNG)与绝大多数的PCR 聚合酶反应缓冲液都是兼容的,但在高离子浓度(>100mM)下活性会受到抑制。
酶保存液
20 mM Tris-HCl, 50 mM NaCl, 1 mM DTT, , 50% Glycerol, 0.1% (w/v) Triton X-100, pH 7.5。
储存
-20℃可保存2年,避免反复冻融。
热失活
95℃,5min。
取1μg dUTP PCR产物进行UNG热失活测试。 Lane 1:对照(不加UNG酶);Lane 2: 1U UNG酶37度消化30min;Lane 3: 1U UNG酶95度加热5min后,再加入PCR产物消化(37度消化30min); Lane 4: 1U UNG酶95度加热10min后,再加入PCR产物消化(37度消化30min);M: D2000 DNA Marker。