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文献和实验时样本之间干扰。 Q:说明书上写细胞量为 1~5 × 105 ,细胞量多的话对检测结果有没有影响? A:建议细胞量最多不要超过 106个,过量的细胞相当于染料被稀释,影响染色和分离效果。一般 2×105 个细胞足够进行凋亡检测了,通常情况下检测 10,000 个细胞就能得到比较好的结果。 Q:是否可以用 PBS 替代凋亡试剂盒里面的 Binding Buffer? A:不行,Binding Buffer 是必须要加的,Annexin V 与 PS 的结合依赖 Ca2+,Binding
染料,它不能透过完整的细胞膜,但在凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。因此将Annexin-V与PI匹配使用,就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来。方法1、悬浮细胞的染色:将正常培养和诱导凋亡的悬浮细胞(0.5~1×106)用PBS洗2次,加入100ul Binding Buffer和FITC标记的Annexin-V(20ug/ml)10ul,室温避光30min,再加入PI(50ug/ml)5ul,避光反应5min后,加入400ul Binding Buffer,立即
before visualization. (Cells must be incubated with Annexin V-FITC before fixation since any cell membrane disruption can cause nonspecific binding of Annexin V to PS on the inner surface of the cell membrane.) 2) Observe the cells under a fluorescence
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