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- 信帆生物
- DW060
- 2025年11月24日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期：
12个月
- 供应商：
上海信帆生物科技有限公司
上海信帆生物科技有限公司供应猪圆环Ⅱ型（PCV2）病毒免疫荧光检测试剂盒！
【产品简介】
圆环病毒免疫荧光技术是根据抗原抗体反应的原理，单克隆抗体先与病毒反应，然后间接的与荧光抗鼠二抗反应，用这种荧光抗体检测细胞内的圆环病毒含量。
【产品内容】
【备用的器材】
长满单层的pk细胞1瓶
排枪
排枪配套使用的枪头
加样槽
离心管
96孔细胞培养板两块
【试剂配置】
6%DMEM培养基：DMEM培养基+6%新生牛血清
2%DMEM培养基：DMEM培养基+2%新生牛血清
荧光二抗工作液：将浓缩荧光二抗按照1:50稀释（用样品稀释液稀释50倍，现用现配）
【操作步骤】
用6%DMEM培养基将PK细胞铺96孔板一个（细胞密度为3*105/ml），次日弃上清接毒。
接毒步骤如下：
1. 无血清培养基将病毒液作连续10倍的稀释，从100-10-8。
2. 将稀释好的病毒接种到96孔培养板中，每一稀释度接种一纵排共8孔，每孔接种100微升。
3. 放置于37℃吸附1小时后，补入2%DMEM培养基每孔100ul，置于37℃CO2培养箱培养。
4. 设正常细胞对照，正常细胞对照作两纵排。
5. 逐日观察，一般需要观察48～72小时后即可测定荧光。
荧光测定步骤如下：
1.弃掉96孔细胞培养板上清，每孔加入150微升样品稀释液，静置30秒，甩去孔内液体，重复洗3次，吸干水分，不用拍板。
2.每孔加入50微升-20℃的固定液放入-20℃静置20分钟，弃掉上清，不用拍板。
3.同上（第一步）重复洗涤3次，吸干水分，不用拍板。
4.每孔加入一抗工作液50ul，盖上盖板膜，放置于37℃40分钟后，同上（第一步）重复洗涤3次，吸干水分，不用拍板。
5.每孔加入荧光二抗工作液50ul，盖上盖板膜，放置于37℃40分钟后，同上（第一步）重复洗涤3次，吸干水分，不用拍板。
6.观察荧光显微镜并根据下表记录不同稀释度的荧光孔数，之后根据10-1～10-8计算出病毒的TCID50含量。
例:
LgTCID50=l-d(s-0.5)
L:高稀释度的对数
D:稀释度对数之间的差
S:阳性孔比率总和
LgTCID50=l-d(s-0.5) =-1-1*（3.375-0.5）=-3.875
TCID50=10-3.875/ml
即：将该病毒稀释10-3.875接种100ul可使50%的细胞发生病变。
【注意事项】
（1）切记做不接毒的空白细胞对照。
（2）样稀清洗与加样时要温柔，并从同一个位点加入。
（3）加样槽用前请用一次性塑料手套套住，加不同溶液时更换手套，防止不同溶液的交叉污染。
（4）配制好的荧光二抗避光保存，现配现用，固定液放-20℃ 1h后再使用。
（5）操作过程中的移液、计时和洗涤必须精确，以免影响结果。
（6）被测病毒-20化开后需要及时接毒，不可放置室温；配置好的培养放4℃于30天内使用。
（7）如果不需要TCID50数值，请根据100～10-8直接观察荧光显微镜即可。
【贮藏与有效期】
低温避光保存，有效期为12个月。
【产品规格】2*96T
猪圆环Ⅱ型（PCV2）病毒免疫荧光检测试剂盒
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文献和实验1.同类系动物 用某一种抗原免疫某一品系的动物，分离纯化的Ab1再免疫相同品系的另外一只动物，可获得抗独特型体。例如Uytdegaag等将Ⅱ型脊髓灰质炎病毒免疫BALB/c小鼠，经杂交瘤技术制备了单克隆抗体（Ab1）,再用Ab1免疫BALB/c小鼠，制备了单克隆Ab2。 2.同种异型动物 Seto等从一只品系为a3b4家兔血清中纯化出IgG作为Ab1，然后免疫B/J品系家兔，得到了含有Ab2的免疫血清。用此方法制备的抗血清中，除了含有抗Id外，还含有抗同种异型决定簇的抗体。
液相芯片，也称为微球体悬浮芯片（suspension array，liquid chip），是基于xMAP（flexible Multi Analyte Profiling）技术的新型生物芯片技术平台，它是在不同荧光编码的微球上进行抗原 抗体、酶 底物、配体 受体的结合反应及核酸杂交反应，通过红、绿两束激光分别检测微球编码和报告荧光来达到定性和定量的目的，一个反应孔内可以完成多达100种不同的生物学反应，是继基因芯片、蛋白芯片之后的新一代高通量分子检测技术平台。迄今为止十年
。如Boehringer Mannheim公司开发的ES300型分析仪、ES600型全自动EIA分析仪属此种类型，但自该公司并入Roche公司以后，各型ES仪器已停止生产。 Abbott公司最早采用0.6cm直径的小珠作为载体，小珠放在相应大小的塑料孔盘中滚动冲洗，属半自动类型。Roche公司的COBAS COREⅡ自动分析仪则采用粒径较小的小珠为固相载体，以辣根过氧化物酶（HRP）标记抗体，以TMB为显色底物，可检测40多个项目，为全自动的分析系统。 Abbott公司应用胶乳微粒作为载体的MEIA（微粒
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