Amplite 比色法草酰乙酸检测试剂盒

 

简要概述

        Amplite 比色法草酰乙酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测草酰乙酸的试剂盒，草酰乙酸是柠檬酸循环的重要组成部分，它与乙酰辅酶A反应生成柠檬酸盐。它还涉及糖异生，尿素循环，乙醛酸循环，氨基酸合成和脂肪酸合成。草酰乙酸的缺乏限制了糖原异生和尿素循环功能，并且可以导致能量产生减少。草酰乙酸也可用作血液谷氨酸清除剂，在创伤性脑损伤后提供神经保护，表现为海马神经元损失减少和神经功能改善。Amplite 比色草酰乙酸检测试剂盒提供了一种灵敏的检测方法，用于定量生物样品中的草酰乙酸。。用吸光度酶标仪在575nm处用Amplite Red监测过氧化氢的产生。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 比色法草酰乙酸检测试剂盒。 

产品说明书

96孔板测定示例

概述

准备测试样品（50μL）和连续稀释的草酰乙酸标准品（50μL）

加入等体积的测定混合物（50μL）

在室温下孵育30分钟至1小时

监测575nm处的吸光度强度

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

 

操作方法

1.准备连续稀释的草酰乙酸标准品和测试样品：

1.1将100μLDdH₂O加入到草酰乙酸盐标准小瓶（组分E）中以制备100mM草酰乙酸标准溶液。

1.2制备草酰乙酸标准稀释液：将10μL100mM草酰乙酸盐（来自步骤1.1）加入990μL测定缓冲液（组分C）中，得到1mM草酰乙酸溶液。 将320μL的1mM草酰乙酸标准溶液加入680μL测定缓冲液中以制备320μM草酰乙酸溶液。 进行1：2连续稀释，得到160,80,40,20,10,5μM连续稀释的草酰乙酸标准品。

1.3根据说明书中的表1，将50μL含草酰乙酸的样品和连续稀释的草酰乙酸标准品加入透明底96孔微量培养板中。

 

2.准备草酰乙酸测定混合物：

2.1Make Amplite 红色底物原液（200X）：将50μLDMSO（组分F）加入Amplite Red底物（组分A）中，制成200X Amplite Red底物原液。

2.2制备草酰乙酸脱羧酶（OAC）储备溶液（100X）：将50μLddH₂O加入草酰乙酸脱羧酶（组分D）中以制备100×草酰乙酸脱羧酶原液。

2.3制备测定混合物：将5mL测定缓冲液（组分C）加入一个酶混合瓶（组分B）中充分混合。 将50μLOAC储备溶液（来自步骤2.2）和25μL200XAmplite Red储备溶液（来自步骤2.1）转移到瓶中并充分混合。

注意1：分析混合物不稳定，及时使用，避免直接暴露在光线下。

注意2：将未使用的200X Amplite Red原液储存在-20℃，避免光照和反复冻融循环。

 

3.运行草酰乙酸测定：

3.1将50μL测定混合物（来自步骤2.3）添加到草酰乙酸标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤1.3），以使总草酰乙酸测定体积为100μL/孔。

注意1：对于384孔板，每孔加入25μL样品，25μLAssay混合液。

注意2：在pH 6.5至7.0下进行草酰乙酸测定。

3.2在室温下孵育反应混合物30分钟至1小时。

3.3使用575 nm的吸光度读板仪检测吸光度的增加。