HUVEC 人脐静脉内皮细胞(免疫荧光鉴定)
一、细胞介绍
HUVEC细胞来源于人静脉内皮,可在半固体培养基中形成克隆,在免疫抑制小鼠中不能形成肿瘤。
二、细胞特性
1) 来源:人脐静脉/血管内皮
2) 形态:上皮细胞样,贴壁生长
3) 含量:>1x106
4) 污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5) 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
6) 培养基:ECM专用培养基
7) 培养条件:气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃
三、细胞免疫荧光鉴定
四、细胞接收后的处理
1) 收到细胞后,请检查发货培养瓶的状况,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2) 在显微镜下确认细胞生长状态时,最好在低倍镜(4或5X物镜)下进行,能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下,同时给刚收到的细胞拍照,(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。
3) 观察好细胞状态后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约4-6h。
4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议1:2传代 。
五、细胞培养步骤
1.培养基及培养冻存条件准备
1) 准备ECM培养基
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:无血清冻存液或90%血清,10%DMSO,现用现配。
2.huvec细胞复苏步骤
a.将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀。
b.在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀。
c.然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6 cm皿中,加入约4 mL培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
3.huvec细胞传代步骤
如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
a.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b.加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,弃去消化液,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3 min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,加少量培养基终止消化。
c.按6-8 mL/瓶补加培养基,轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心4 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。
d.将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。
4.huvec细胞冻存步骤
待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例
a.收集细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。
b.根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5×106~1×107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。
c.将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
六、huvec细胞图片