HUVEC人脐静脉内皮细胞（免疫荧光鉴定）

HUVEC 人脐静脉内皮细胞(免疫荧光鉴定)
一、细胞介绍

HUVEC细胞来源于人静脉内皮，可在半固体培养基中形成克隆，在免疫抑制小鼠中不能形成肿瘤。

二、细胞特性

1) 来源：人脐静脉/血管内皮

2) 形态：上皮细胞样，贴壁生长

3) 含量：>1x106

4) 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5) 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

​​​​6) 培养基：ECM专用培养基

7) 培养条件：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

三、细胞免疫荧光鉴定

四、细胞接收后的处理

1) 收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2) 在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜(4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，(10×，20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。

3) 观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约4-6h。

4)备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议1：2传代 。

五、细胞培养步骤

1.培养基及培养冻存条件准备

1) 准备ECM培养基

2) 培养条件： 气相：空气，95%;二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3) 冻存液：无血清冻存液或90%血清，10%DMSO，现用现配。

2.huvec细胞复苏步骤

a.将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。

b.在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。

c.然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL培养基，培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

3.huvec细胞传代步骤

如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b.加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，加少量培养基终止消化。

c.按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d.将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

4.huvec细胞冻存步骤

待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例

a.收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b.根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c.将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

六、huvec细胞图片