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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
低温冷藏
- 保质期:
详见说明书
- 英文名:
RT-LAMP kit for influenza A virus subtype 5
- 库存:
100
- 供应商:
上海抚生
- 规格:
50次
-20℃避光保存,避免反复冻融,有效期6个月。
【样本采集、存放及运输】
u 样本采集:各类型样本按照常规方法采集;
u 存放:样本在2~8℃条件下保存应不超过72h,-70℃以下可长期保存,但应避免反复冻融(最多冻融3次);
u 运输:采用冰壶或泡沫箱加冰密封进行运输。
需要自备的器材:
1.仪器:分析天平、离心机、荧光 PCR 扩增仪、组织研磨器、-20 ℃冰箱、可调移液器(2 µL、20µL、200 µL、1000 µL)。
2.耗材:荧光 PCR 专用反应管、眼科剪、眼科镊、生理盐水、1.5 mL 经焦碳酸二乙酯(DEPC)水
处理的灭菌离心管、吸头(10 µL、200 µL、1000 µL)、灭菌双蒸水。
产品特点:
1. 使用化学修饰的热启动聚合酶,反应特异性高,*程度地避免了非特异扩增;
2. 反应缓冲液经充分优化,反应灵敏快速,40个循环只需20多分钟;
3. 抗干扰能力强,反应重复性高,适合对土壤、粪便、肿瘤和血液来源的复杂样本中的靶基因进行检测分析。
在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,zui后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
特异性荧光标记:
TaqMan法
TaqMan探针的特性:
(1)5′端标记有报告基团(Reporter, R),如FAM、VIC等
(2)3′端标记有荧光淬灭基团 (Quencher, Q)
(3)探针完整,R所发射的荧光能量被Q基团吸收 ,无荧光, R与Q分开,发荧光
(4)Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性,可水解探针
相对定量通过内标定量:
内标(Endogenous Control)通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因,在细胞中的表达量或在基因组中的拷贝数恒定,受环境因素影响小,内标定量结果代表了样本中所含细胞或基因组数量。
实验注意事项:
1)RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料,不同的样本有不同要求,实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况;
2)客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号;
3)客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4)样本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类,探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加,非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量(包括绝对定量和相对定量)和定性分析。
主要服务:DNA或RNA的绝对定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术:引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
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文献和实验在 1 个小时内就可得出是否感染禽流感病毒的初步结论,从而为疫情的控制和相关应急措施的实施赢得极其宝贵的时间。 目前世界上已有的流感快速诊断试剂盒仅能鉴别出型,即有型的特异性,但无法鉴别出亚型,对于型内高致病性、低致病性和无致病性亚型却缺乏基本的识别能力。采用传统病原学检测方法 —— 鸡胚病毒培养法检测禽流感病毒需要数天时间,琼脂凝胶免疫扩散试验 (AGID) 需要 3 ~ 5 天,最快的 RT - PCR 也需要 4 小时以上,检测时间过长。 以 RT - PCR 法检测需要
实验室检测和快速诊断的标准如《GB/T 19438.1-2004禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法》、《GB/T 19438.2-2004 H5亚型禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法》、《GB/T 19438.3-2004 H7亚型禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法》等。以上实时荧光定量PCR技术在禽流感检测方面的国家标准是该技术在当前的人感染猪流感诊断中应用的基础和前提。实时荧光定量PCR技术及在我国卫生应急中的应用要求实时荧光定量PCR技术(Real-time quantitative
人:郭元吉、王敏,联系电话:010-63534632,010-63581337,传真:(010)63534632。 五、标本检测方法 1.禽H5 病毒核酸检测 材料:疑似禽流感患者的咽、鼻拭子或含漱液,死亡病例的尸检肺组织、气管分泌物。 方法: RT-PCR,用于禽H5 亚型流感病毒的快速检测、测序及排除工作 试剂:特异性H5 及甲型流感病毒的引物、病毒RNA 提取试剂盒、逆转录酶、Taq DNA 聚合酶等试剂, 建议使用德国QIAGEN 的Rneasy Mini Kit (病毒
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