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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
18
- 英文名:
SP Sephadex C-50
- CAS号:
61374-06-9
- 保质期:
2年
- 供应商:
上海联迈生物工程有限公司
- 保存条件:
RT
- 规格:
25g
- 英文名:
- SP Sephadex C-50
- 别名:
- CAS号:
- 61374-06-9
- MDL:
- MFCD00132782
- 储存条件: RT
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文献和实验列为5'ACGACTCACTATAGGGCTTTTTTTTTTTTMN3',其中 M=A/G/C。N=A /G/C/T],以总RNA为模板进行逆转录反应,每管反应体系如下:总RNA l.0μg,AP 4 pmol ,70℃ 5 min,加入50 mmol/L Tris-HCl(pH8.3),75 mmol/L KCl,3 mmol/L MgCl2,10mmol /L DTT,25μmol/L,dNTPmix(1∶1∶1∶1),SuperScriptⅡ 60 Units,总反应体系20 μl ,42℃ 5 min,50℃ 50 min,70℃ 15 min
5ml管中, 迅速置于37℃摇床,150rpm,培养1小时。 8)取菌液50~100μl涂布在含氨苄青霉素、IPTG和X-Gal的LB平板上,37℃培养过夜,筛选转化子。注意要设空白,及质粒DNA对照。 (3)克隆片段的检测-1 1)在LB平板上挑取白色单菌落,置于2ml含氨苄青霉素的LB液体培养基中,37℃、200rpm振荡培养12-16小时; 2)4℃、12,000rpm离心30秒,收集细胞沉淀; 3)碱裂解法提取并纯化质粒DNA; ①将细菌沉淀,菌体重悬于100µl用冰
10 倍贮存液制成的 200 mmol/L KCl ( 在 1 L 中溶解 14.9 g) 与 50 mmol/L 的 EDTA ( 在 1L 中溶解 18.6 g) 混合在一起。-20°C 贮存数月。 ( 2 ) 均匀的介质:匀质化介质的最低要求,是存在一个渗透势从而减少细胞器的肿胀和破裂,缓冲液的 pH 7~8,从而减少水解酶活性和抵消液泡的低 pH,并且控制自由二价金属离子。β-甘油,原钒酸钠,邻菲罗啉构成磷蛋白磷酸酶抑制剂的混合物,该抑制剂被证明有利于维持细胞活性的特异性,如在 PM
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