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文献和实验应用于微量组分的测定。通常中测定含量在10-1~10-4mg・L-1的痕量组分。比色分析如同其他仪器分析一样,也具有相对误差较大(一般为1%~5%)的缺点。但对于微量组分测定来说,由于绝对误差很小,测定结果也是令人满意的。在现代仪器分析中,有60%左右采用或部分采用了这种分析方法。在医学学科中,比色分析也被广泛应用于药物分析、卫生分析、生化分析等方面。 一、物质的颜色和光的关系 光是一种电磁波。自然是由不同波长(400~700nm)的电磁波按一定比例组成的混合光,通过棱镜可分解成红
光经的比色杯在595nm 波长下比色,记录各管测定的光密度OD595nm,并做标准曲线。 表1 低浓度标准曲线制作 (2)0~1 000μg/mL 标准曲线的制作:另取6 支10mL 具塞试管,按表2 取样。其余步骤同(1)操作,做出蛋白质浓度为0~1 000μg/mL 的标准曲线。 表2 高浓度标准曲线制作 2.样品提取液中蛋白质浓度的测定 (1)待测样品制备:称取新鲜绿豆芽下胚轴2g 放入研钵中,加2mL 蒸馏
0.2% 时,可使包被在固相上的抗原或抗体解吸附而减低试验的灵敏度。 (2) 流水冲洗式:流水冲洗法最初用于小珠载体的洗涤,洗涤液仅为蒸馏水甚至可用自来水。洗涤时附接一特殊装置,使小珠在流水冲击下不断地滚动淋洗,持续冲洗 2 分钟后,吸干液体,再用蒸馏水浸泡 2 分钟,吸干即可。浸泡式犹如盆浴,流水冲洗式则好比淋浴,其洗涤效果更为彻底,且也简便、快速。已有实验表明,流水冲洗式同样也适用于微量滴定板的洗涤。洗涤时设法加大水流量或加大水压,让水流冲击板孔表面,洗涤效果更佳。 6. 显色和比色
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