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荧光酪氨酸酶检测试剂盒
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Amplite 荧光酪氨酸酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于酪氨酸的试剂盒,酪氨酸酶是一种在从细菌和真菌到动物的各种物种中表达的酶。酪氨酸酶对药物发现,生命科学研究,食品工业和化妆品工业具有重要意义,因为它在黑色素的生物合成途径中起重要作用。酪氨酸酶抑制剂的开发和筛选受到黑色素瘤相关疾病的极大关注。酪氨酸酶水平和活性在黑素瘤中高度上调,并且被认为是监测黑素瘤相关疾病的可靠测试。AAT Bioquest开发了Amplite 荧光酪氨酸酶检测试剂盒。它是一种简单,一步到位且可靠的检测方法,可以以非常高的灵敏度监测酪氨酸酶活性。该测定使用专有的荧光底物,其在与酪氨酸酶反应时明显增加其在440nm处的荧光强度。440nm处荧光强度的增加与酪氨酸酶活性密切相关。该测定试剂盒设计用荧光酶标仪进行运行。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Amplite 荧光酪氨酸酶检测试剂盒。
样品实验方案
简要概述
1.准备和添加标准品和样品(50μL)2.准备并添加酪氨酸酶蓝工作溶液到标准品和样品孔(50μL)3.将板在室温下孵育60至120分钟4.监测Ex / Em = 340 / 440nm处的荧光强度
溶液制备
1.储备溶液
所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。1.1酪氨酸酶原液(2000 U / mL):将120μL测定缓冲液(组分B)加入酪氨酸酶标准品(组分A)中并充分混合。 注意:将未使用的酪氨酸酶原液储存在-20°C,一次性使用等分试样。
1.2酪氨酸酶蓝原液(100X):将50μLDMSO(组分D)加入酪氨酸酶蓝(组分C)中并充分混合。 注意:将未使用的酪氨酸酶蓝原液在-20°C下以一次性等分试样储存。
2.标准溶液
酪氨酸酶标准使用酪氨酸酶原液(2000 U / mL)和测定缓冲液产生400 U / mL终浓度的酪氨酸酶标准溶液(T1)。 然后进行1:2连续稀释以获得剩余的连续稀释的酪氨酸酶标准品(T2-T7)。 注意:井中标准品的最终浓度为2X。 注意:使用提供的标准,如果使用建议的浓度,可以重复生成2条标准曲线。
3.工作溶液
酪氨酸酶蓝工作溶液:通过将5μL酪氨酸酶蓝原液(100X)加入1mL测定缓冲液(组分B)中进行1:100稀释并充分混合。
样品分析
表1.白色透明底96孔微孔板中酪氨酸酶标准品和测试样品的布局。 酪氨酸酶标准品(TS1-TS8 = 200至0U / mL),TS =测试样品
1.以下协议可用作指南,应根据需要进行优化。
2.根据测定缓冲液中的建议制备标准品和测试样品,并在微孔板中加入50μL各自。
3.将50μL酪氨酸酶蓝工作溶液加入标准品和样品的孔中。
4.将反应在37℃孵育60至120分钟。 注意:反应可保持长达6小时。
5.用荧光读板仪在Ex / Em = 340 / 440nm处监测荧光强度,截止值= 420nm。
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