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破骨细胞骨吸收功能检测

背景简介：

破骨细胞是一种多核的，具有骨吸收功能的骨组织细胞，在骨吸收过程中发挥着至关重要的作用。破骨细胞骨吸收功能的异常会引发一系列的病症，如骨质疏松症、关节置换术后假体松动、骨硬化症和牙周病变等。破骨细胞骨吸收功能的研究对于各类骨疾病的防治具有重要意义。在破骨细胞骨吸收研究中，不仅要了解破骨细胞骨吸收过程，还需要评价破骨细胞的骨吸收功能。骨吸收陷窝形态分析法，被广发用于评价破骨细胞骨吸收功能研究。

检测原理：

当破骨细胞粘附在骨基质表面，会在其骨基质质检形成一个局部微酸环境，进而发挥骨吸收功能兵形成吸收陷窝，即骨吸收陷窝。骨吸收陷窝是破骨细胞骨销售的最直接结果，其数量，大小和深度能直接反映破骨细胞骨吸收的能力。骨吸收陷窝形态分析法是通过对骨吸收陷窝进行形态计量分析，来评价破骨细胞骨吸收功能，该方法是目前判断破骨细胞骨吸收功能的最可靠方法。

北京博蕾德生物技术有限公司提供用于200um, 400um 厚度破骨细胞骨吸收功能检测骨切片，适用于96孔板检测。

产品描述：

开始骨吸收实验前用培养基重悬骨切片，成熟或早熟的破骨细胞，无论是由外周血单核细胞（PBMC）或共培养产生的，都可以将细胞分散覆盖于骨切片上。根据破骨细胞的成熟形态和影响因素，凹点会在3-14天出现。破骨细胞数量可通过Tracp 活性实验来观察，吸收凹点和沟可通过甲苯蓝染色观察（如图2.）。

来源：骨切片由牛股骨的皮质部分制成，完全适合96孔板，直径6mm。

厚度：1）0.2mm（适用于免疫荧光，共聚焦实验）。

        2）0.4mm（适用于下游分析）

储存：置于4°C下96%乙醇中。

应用：用于骨吸收实验检测，通过破骨细胞的骨吸收形成的吸收坑，可以用来监测培养的破骨细胞的骨吸收情况，完全适合96孔板。

操作流程：

该方法提供一种易于检测的定量方案，用于体外测定破骨细胞介导的骨吸收。破骨细胞接种于骨切片上，吸收坑的形成可以通过甲苯胺蓝染色进行定量。

实验材料和试剂：

1）破骨细胞

2）骨切片

3）异丙醇

4）甲苯胺蓝（Sigma cat#198161）

5）超纯水

6）96孔细胞培养板（Greiner , Cat#650185）

实验设备：

1.       骨形态测量系统

2.       超声波清洗器

操作流程：

1.  破骨细胞接种于（250000 细胞/孔）含和不含颅骨成骨细胞的96孔细胞培养板上（提前孔内放置骨切片）。

2.  细胞在合适的培养基中37℃培养至少14天。

3.  此后，用PBS洗涤细胞两次，在250ul 70%异丙醇中，用超声波高功率处理至少15分钟，使细胞从骨切片脱落。

注意：250ul 70%异丙醇处理使细胞更容易从骨切片脱落。

4.  加入100ul 甲苯胺蓝溶液（1%溶解于水），室温染色2分钟。

5.  用250ul 超纯水冲洗骨切片至少5次，以洗掉切片上的残留物。

吸收坑被染成深蓝色（图1），吸收坑面积可以通过骨测量系统进行量化或者吸收坑可通过光学显微镜观察计数。

图1.骨切片上形成的吸收坑

参考文献：（以上流程来源于参考文献，仅供参考）

Scholtysek, C., Katzenbeisser, J., Fu, H., Uderhardt, S., Ipseiz, N., Stoll, C., Zaiss, M. M.,

Stock, M., Donhauser, L., Bohm, C., Kleyer, A., Hess, A., Engelke, K., David, J. P.,

Djouad, F., Tuckermann, J. P., Desvergne, B., Schett, G. and Kronke, G. (2013).

PPARbeta/delta governs Wnt signaling and bone turnover. Nat Med 19(5): 608-613.

产品订购：

品牌	英文名称	中文名称	货号	规格
Bone slice	Bone Slices	骨切片	250	50片（200um）
Bone slice	Bone Slices	骨切片	200	50片(400um)
IDS	Bone Slices	骨切片	DT-1BON1000-96	50片（200um