大鼠苹果酸脱氢酶（MDH）ELISA试剂盒

大鼠苹果酸脱氢酶（MDH）ELISA试剂盒
本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中大鼠苹果酸脱氢酶（MDH）的活性

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l  有效期：6个月
l  保存条件：2-8℃
l  本试剂盒仅供科研使用，不得用于临床诊断
 
实验原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被大鼠苹果酸脱氢酶（MDH）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠苹果酸脱氢酶（MDH）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
 
样本处理及要求
1.  血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2.  血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3.  组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4.  细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
 
需要而未提供的试剂和器材
1.  酶标仪（450nm）
2.  高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.  37℃恒温箱
4.  蒸馏水或去离子水
 
试剂盒组成
  备注：
1.  标准品浓度依次为：80、40、20、10、5、2.5 U/L
2.  经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过最大标准品浓度时，可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。