细胞染色试剂
DiI 即 DiIC18(3),全称为 1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'tetra-
methylindocarbocyanine perchlorate,是最常用的细胞膜荧光
探针之一,呈现橙红色荧光。DiI 是一种亲脂性膜染料,进
入细胞膜后可以侧向扩散逐渐染色整个细胞的细胞膜。DiI
在进入细胞膜之前荧光非常弱,仅当进入到细胞膜后才可以
被激发出很强的荧光。常与 DiA 一起用于细胞膜双色标记。
DiI 作为示踪剂或长期示踪剂(long-term tracer),可以被
广泛用于正向或逆向,活的或固定的神经等细胞或组织。
DiI 通常不会影响细胞的生存力(viability)。被 DiI 标记的神
经细胞在体外培养的条件下可以存活长达 4 周,在体内可以
长达一年。DiI 在被固定的神经元细胞膜上的迁移速率为
0.2-0.6 mm/day,在活的神经元细胞膜上的的迁移速率为 6
mm/day。
DiI 除了用于细胞膜荧光标记外,还可用于检测细胞的
融 合 和 粘附 , 发 育 或 移植 过 程 中 细 胞的 迁 移 , 通 过
FRAP(Fluorescence Recovery After Photobleaching)检测脂在
细胞膜上的扩散,检测细胞毒性和标记脂蛋白等。
DiI 染色后可进行(CH2O)n(不可使用甲醇等其他试
剂)的固定,但不建议在染色后进行透化的过程。此外,在
固定透化(室温下用 0.1% TritonX-100 透化)后,也可以很
好地进行质膜染色